Proteină galbenă fluorescentă

Proteina fluorescentă galbenă este o  formă genetică mutantă a proteinei fluorescente verzi ( GFP ) izolată din meduza Aequorea victoria . Se caracterizează printr-un maxim de absorbție la 514 nm și un maxim de fluorescență la 527 nm. Este utilizat pe scară largă ca etichetă fluorescentă în biologia celulară și moleculară pentru a studia expresia proteinelor celulare . În plus față de acesta, au fost dezvoltate o serie de alte forme mutante de GFP , cum ar fi albastru, cyan etc. [1].

Cerere pentru FRET

Spectrul de absorbție al YFP se suprapune destul de puternic cu spectrul de fluorescență al CFP ( ing.  Cyan Fluorescent Protein ), astfel încât acești doi fluorofori sunt utilizați pentru a crea biosenzori , care se bazează pe fenomenul de transfer de energie Förster (FRET) . Astfel de senzori sunt utilizați pentru a detecta anumite evenimente care au loc în celulele vii. În special, activitatea enzimatică poate fi determinată în acest mod .

De regulă, molecula unui astfel de senzor include 4 domenii [2] :

  1. proteina care este purtătoarea senzorului (poate fi aproape orice proteină);
  2. fluorofor CFP ;
  3. un domeniu care își schimbă structura ca răspuns la un anumit efect (de exemplu, fosforilarea );
  4. fluorofor YFP .

Când un astfel de senzor este iradiat cu un laser cu o lungime de undă care excită doar CFP (de exemplu, 440 nm - aproape nu excită YFP , dar excită puternic CFP ), se poate observa fluorescența ambilor fluorofori. După un impact adecvat asupra domeniului 3, structura senzorului se modifică, drept urmare fluoroforul YFP se îndepărtează de CFP și eficiența transferului Förster scade (în funcție de cât de departe au fost separați fluoroforii unul de celălalt). Ca rezultat, intensitatea fluorescenței CFP crește, în timp ce cea a YFP scade. Astfel, raportul dintre fluorescența YFP și fluorescența CFP poate fi utilizat pentru a cuantifica modificarea conformației biosenzorului .

Note

  1. Uemura, T.; Kim, H.; Saito, C.; Ebine, K.; Ueda, T.; Schulze-Lefert, P.; Nakano, A. Qa-SNARE-urile localizate în rețeaua trans-Golgi reglează căile multiple de transport și rezistența la boli extracelulare la plante  (engleză)  // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America  : journal. - 2012. - Vol. 109 , nr. 5 . - P. 1784-1789 . - doi : 10.1073/pnas.1115146109 . — PMID 22307646 .
  2. Acces: Activarea zonei medii a aurorei B în anafază produce un gradient de fosforilare intracelulară: Nature . Consultat la 7 decembrie 2010. Arhivat din original la 31 octombrie 2010.

Vezi și

Bibliografie

Link -uri