Angiogeneza terapeutică

Angiogeneza terapeutică (numită și șuntare biologică ) este o tactică de stimulare a formării de noi vase de sânge pentru tratamentul sau prevenirea stărilor patologice caracterizate prin scăderea acestei funcții [1] .

Domeniul de aplicare

Nevoia de angiogeneză terapeutică se concentrează în zona formelor distale de ischemie cronică a membrelor inferioare (CLLI), boli coronariene , infarct miocardic , în care metodele chirurgicale de tratament sunt fie imposibile, fie insuficient de eficiente, asociate cu o frecvență ridicată. de contraindicații și complicații [2] [3] .

Istoria angiogenezei terapeutice

Conceptul de angiogeneză terapeutică a început să se dezvolte după lucrările lui J. Folkman , care a dezvoltat o teorie despre dezvoltarea și menținerea unei aprovizionări adecvate cu sânge cu ajutorul factorilor de creștere angiogene în țesuturile tumorale.
După identificarea factorilor de creștere a vaselor de sânge, cercetătorii au început să testeze ipoteze privind stimularea angiogenezei în tratamentul stărilor ischemice. Pentru prima dată în practica clinică, angiogeneza terapeutică a fost folosită de J. Isner. În 1994, unui pacient de 71 de ani, în stare gravă, cu ischemie critică a membrelor inferioare (CLLI), gradul IV, conform clasificării A.V. Pokrovsky-Fontein, i s-a introdus gena VEGF-165 într-un vector plasmidic [4] [ 4]. 5] .
Următorul investigator clinic a fost I. Baumgartner, care a efectuat o serie de studii la pacienții cu CLLI, a descris și clasificat posibile efecte secundare [6] .

Mecanismul angiogenezei terapeutice

În mod convențional, există două procese care stau la baza angiogenezei terapeutice: angiogeneza și vasculogeneza [7] .
Vasculogeneza este procesul de formare in situ a vaselor de sânge din celulele progenitoare endoteliale (EPC), care migrează și fuzionează cu alte celule progenitoare endoteliale în capilare și se diferențiază în celule endoteliale pentru a forma noi vase. Această formă este cea mai frecventă în perioada embrionară [8] .
Angiogeneza include prelungirea vaselor deja formate și este un proces de încolțire a noilor capilare, inclusiv activarea celulelor endoteliale, degradarea matricei extracelulare, proliferarea și migrarea endoteliocitelor și formarea de structuri vasculare primare foarte permeabile. Ulterior, stabilizarea și „creșterea” structurilor vasculare primare are loc datorită recrutării de celule de alt tip: pericite și celule musculare netede, rezultând organizarea unei rețele vasculare tridimensionale complexe [8] .
Principalul factor stimulator al angiogenezei în condiții fiziologice și patologice este lipsa oxigenului. Hipoxia stimulează formarea majorității factorilor angiogenici și, mai ales, principalul regulator al angiogenezei atât în ​​perioada embrionară, cât și în perioada postnatală de dezvoltare a organismului - factorul de creștere a endoteliului vascular (VEGF) și receptorii săi (VEGF-R). Au fost identificați peste 20 de factori care stimulează sau inhibă procesul de angiogeneză (Tabelul 1). Unii factori, în funcție de doză, pot fi atât inductori ai angiogenezei, cât și inhibitori [9] [10] . În prezent, termenul „angiogeneză terapeutică” include ambele procese descrise mai sus pentru creșterea noilor vase de sânge [11] [12] [13] .

Tabelul 1  - „Inductori și inhibitori ai angiogenezei”

Metode clinice de angiogeneză terapeutică

Pentru procesul de angiogeneză terapeutică sunt utilizate diferite abordări terapeutice:

• introducerea de proteine ​​recombinate - inductori de angiogeneză (factori de creștere);
• utilizarea terapiei celulare;
• introducerea de constructe genice care codifică factori.

Introducerea proteinelor recombinante - inductori ai angiogenezei

Cunoscând în detaliu efectele fiziologice ale factorului de creștere endotelial vascular și având o experiență pozitivă în utilizarea factorilor proteici care stimulează hematopoieza, oamenii de știință au sintetizat molecule proteice ale factorului de creștere a endoteliului vascular și factorului de creștere a fibroblastelor de bază (bFGF).
Primele studii clinice necontrolate la pacienții cu boală coronariană și la pacienții cu ischemie critică a membrelor inferioare (CLLI) folosind proteine ​​recombinante au arătat rezultate preliminare încurajatoare în ceea ce privește eficacitatea. Cu toate acestea, datele din studiile dublu-orb, controlate cu placebo au fost mai puțin optimiste. Două studii mari care au testat administrarea intracoronară a factorilor de creștere recombinanți (VEGF în studiul VIVA la 178 de pacienți CAD care nu erau candidații optimi pentru revascularizare chirurgicală sau endovasculară; FGF-2 în primul studiu la 337 de pacienți similari) nu au găsit diferențe cu rezultă în grupuri placebo.
În studiul TRAFFIC (FGF-2 a fost administrat de două ori în artera femurală la pacienții cu CLLI), în care o creștere mai pronunțată a timpului de mers fără durere la cei care au primit FGF-2 în primele 3 luni. s-a echilibrat după 6 luni. prin creșterea timpului de mers fără durere în grupul placebo. Cu toate acestea, rezultatele acestui studiu au ridicat un anumit optimism cu privire la posibilitatea utilizării FGF-2 recombinant în CLLI.
Este posibil ca eșecul studiilor controlate privind angiogeneza terapeutică folosind factori de creștere recombinanți să se fi datorat unei metode incorect alese de introducere a factorului. Proteinele recombinante au un timp de înjumătățire scurt în fluxul sanguin, în plus, s-a demonstrat că prin calea de administrare intravasculară o foarte mică parte a proteinei este reținută în miocard (0,1% pentru administrarea intravenoasă și 5% pentru administrarea intracoronară). ). Pentru utilizarea eficientă a factorilor de creștere recombinanți, este necesară introducerea lor local în miocard sau mușchii scheletici sub formă de complexe cu proteine ​​de matrice care asigură eliberarea locală pe termen lung a factorului [14] .

Utilizarea terapiei celulare

Formarea de noi vase este considerată în prezent ca două procese interdependente - angiogeneza și vasculogeneza. Vasculogeneza implică participarea celulelor progenitoare endoteliale ale măduvei osoase (EPC), care se deplasează la locul formării noilor vase, unde se diferențiază în celule endoteliale deja existente. Cea mai bine studiată metodă de terapie celulară pentru bolile ischemice ale extremităților este stimularea eliberării celulelor EPC în fluxul sanguin, izolarea acestora din fluxul sanguin și introducerea în zona ischemică. Pe baza analizei preclinice și a unui număr de studii clinice, se poate concluziona că introducerea precursorilor de endoteliocite sau stimularea eliberării precursorilor de celule endoteliale accelerează formarea vaselor colaterale, minimizând în același timp zona de leziuni ischemice. Cu toate acestea, procesul necesită un laborator special echipat, iar numărul de celule obţinute variază de obicei.
Mecanismul acțiunii angiogenice a celulelor stem (SC) derivate dintr-un organism adult include probabil efecte paracrine asociate cu activitatea secretorie a celulelor și diferențierea lor în celule vasculare specifice, precum și fuziunea cu celulele tisulare. Greutatea specifică a fiecăruia dintre aceste mecanisme nu a fost pe deplin determinată, iar datele experimentale sunt destul de contradictorii. Cu toate acestea, în mare măsură, stimularea neovascularizării cu introducerea SC se datorează activității lor secretoare. Acest lucru este confirmat de faptul că a fost observată o creștere a numărului de vase în miocardul animalelor de experiment odată cu introducerea aproape tuturor tipurilor de celule utilizate pentru terapia celulară: celule hematopoietice și mezenchimale ale măduvei osoase, precursori EC (circulante și măduva osoasă), celule obținute din sângele din cordonul ombilical și chiar din mioblaste scheletice [14] [15] .

Introducerea de constructe de gene care codifică factori de creștere

O alternativă la terapia cu proteine ​​recombinate poate fi terapia genică . Două tipuri de sisteme vectoriale predomină, care sunt utilizate pentru a furniza o genă terapeutică în regiunea ischemică: plasmide și adenovirusuri recombinate [16] .
Spre deosebire de proteinele recombinate, constructele genetice lucrează în țesutul țintă de la una până la câteva săptămâni și asigură o creștere mai puțin bruscă și mai lungă a conținutului de factor angiogenic, ceea ce evită injecțiile frecvente și repetate, care, la rândul lor, evită sensibilizarea organismului [14] . În studiile preclinice pe animale, utilizarea plasmidelor ADN a demonstrat că expresia genelor durează de la câteva zile până la câteva luni, cu o probabilitate destul de scăzută de transmitere ulterioară. Această perioadă este considerată relativ scurtă în comparație cu vectorii virali, ceea ce reprezintă un factor de siguranță pentru prepararea bazată pe vectorul plasmidic. Plasmidele sunt distruse atât extracelular, cât și intracelular de către nucleaze , ceea ce asigură localizarea și limitarea în timp a procesului. În timpul unui număr mare de studii de terapie genică pentru stimularea angiogenezei, au fost utilizate în principal injecții locale pentru a obține siguranță și eficacitate maximă [17] .
Utilizarea vectorilor adenovirali se caracterizează printr-o eficiență ridicată a transferului de material genetic. Dar trebuie luat în considerare faptul că anticorpii adenovirali sunt adesea prezenți în corpul uman, reducând eficiența transferului la un nivel de 5% - un nivel comparabil cu cel caracteristic al transferului de gene non-virale. De asemenea, transferul de gene virale necesită măsuri speciale de biosecuritate, care nu sunt necesare pentru vectorii de transfer de gene non-virali. Problemele de siguranță se reflectă și în incidența crescută a evenimentelor adverse în studiile clinice cu vectori adenovirali: febră tranzitorie, proteina C reactivă crescută, enzime hepatice crescute și titruri de anticorpi adenovirali [18] .

Realizarea informațiilor conținute în plasmidă sau virusul recombinant are loc ca urmare a sintezei proteinelor. Sinteza se desfășoară în mod tradițional ( transcriere , traducere ). Formarea factorului de creștere angiogenic provoacă o serie de modificări fiziologice care conduc la creșterea unui nou vas. Un număr mare de factori angiogenici sunt implicați în procesul de angiogeneză, dar cea mai activă citokină proangiogenă este factorul de creștere a endoteliului vascular (VEGF), care este și cel mai studiat atât în ​​studiile preclinice, cât și în cele clinice.

Procesul de creștere a vaselor cu participarea sa poate fi descris în următoarea secvență [11] :

1. Legarea VEGF la receptorii de pe suprafața celulelor endoteliale din vasele existente.
2. Activarea endoteliocitelor datorită modificărilor configurației receptorilor VEGF.
3. Eliberarea de către celulele endoteliale activate a enzimelor proteolitice care dizolvă membrana bazală din jurul vaselor materne.
4. Dizolvarea substanței matricei prin metaloproteazele matricei.
5. Proliferarea și migrarea celulelor endoteliale prin membrana bazală în zona ischemică folosind molecule de adeziune pe suprafața celulei.
6. Legarea endoteliocitelor între ele și formarea structurilor tubulare.
7. Formarea anselor vasculare.
8. Diferențierea anselor vasculare în vase arteriale și venoase.
9. Maturarea noilor vase de sânge prin atașarea altor tipuri de celule parietale (mușchi neted, pericite) și stabilizarea arhitecturii vasculare.
10. Începutul fluxului sanguin într-un vas matur stabil.

Modificarea angiogenică a materialelor (vitalizarea)

Absența unui pat vascular în implanturile plasate, precum și dezvoltarea și integrarea sa insuficient de rapidă în rețeaua vasculară a zonei primitoare, este una dintre cele mai importante probleme asociate cu „eșecul” implantului de a „funcționa”. Soluția problemei vascularizării implanturilor artificiale se dezvoltă în două moduri: 1 - crearea condițiilor de vascularizare activă după implantare folosind diverse structuri de bioinginerie (folosind factori de creștere, celule stem); 2 - crearea rețelei vasculare înainte de implantarea în organism in vitro [19] .

Preparatele de terapie genică pe bază de plasmide care codifică factorii de creștere a endoteliului vascular sunt utilizate pentru modificarea angiogenică ( vitalizarea ) materialelor fibroase sintetice [7] . Astfel de materiale modificate activate de gene sunt folosite pentru a crea matrici vascularizate de organe și țesuturi bioinginerești [7] [20] .

Preparate genetice pentru angiogeneza terapeutică

La solicitarea de publicații în baza de date referitoare la angiogeneza terapeutică și factorii de creștere s-au obținut următoarele statistici:

Studiul clinic este dominat de constructe de terapie genică care poartă gena VEGF. Tabelul nr. 2 reflectă studiile majore efectuate și în curs de desfășurare cu aceste medicamente prototip.

Tabelul 2. Studii clinice ale constructelor de terapie genică cu gena VEGF

Abrevieri: IHD — cardiopatie ischemică; HINK - ischemia cronică a extremităților inferioare; KINK - ischemie critică a extremităților inferioare

Primul și singurul medicament de terapie genică pentru angiogeneza terapeutică a fost înregistrat în Rusia în 2011 (data Republicii Uzbekistan -28.09.2011). Medicamentul este un acid dezoxiribonucleic suprarulat cu plasmid pCMV-VEGF165 care codifică factorul de creștere endotelial vascular uman. Indicații pentru utilizarea medicamentului: în terapia complexă pentru revascularizare în ischemia extremităților inferioare de origine aterosclerotică (gradul IIa-III conform A.V. Pokrovsky-Fontein).
Medicamentul a intrat pe piață sub denumirea comercială „ Neovasculgen ”. Se administreaza local, intramuscular, cat mai aproape de zona ischemica si stimuleaza dezvoltarea circulatiei colaterale. [2, 38, 39]
Conform rezultatelor studiilor clinice ale medicamentului rusesc, pot fi remarcate următoarele caracteristici clinice ale angiogenezei terapeutice:

1. Utilizarea medicamentului în tratamentul conservator complex duce la o îmbunătățire clinică stabilă (menținerea efectului timp de 3 luni, 6 luni, 1 an, 2 ani), care se exprimă printr-o creștere a distanței de mers pe jos fără durere, o creștere a indicele glezne-brahial și tensiunea transcutanată de oxigen [17] .
2. Indicatorul „număr de amputații majore, deces” la pacienții cu ischemie în stadiul III conform clasificării A.V. Pokrovsky-Fontein este de 6% [2].
3. Efect clinic pronunțat în diferite grade de severitate a ischemiei extremităților inferioare conform clasificării A. V. Pokrovsky-Fontein (IIa, IIb, III) [38].

Tabelul 3. Rezultatele utilizării unui medicament bazat pe un acid nucleic (Neovasculgen) care codifică VEGF în terapia conservatoare complexă [17] .

* diferențe semnificative statistic față de valoarea inițială (p≤0,05, testul Wilcoxon neparametric).
La evaluarea dinamicii indicatorilor, luând în considerare gradul inițial de ischemie, sa constatat că pentru toate grupele de pacienți (IIA, IIB, stadiul III de ischemie) o dinamică pozitivă persistentă caracteristică. Astfel, distanța de mers fără durere a crescut într-o măsură mai mare în ischemia moderată și severă, fapt dovedit de creșterea cu 90 de zile. cu 160% și 173% cu IIB și III Art. ischemie, respectiv. Pare foarte semnificativ faptul că ABI la cel mai sever grup de pacienți a crescut cu mai mult de 0,1 de la nivelul de 0,33±0,08 la 0,46±0,07 după 90 de zile. și până la 0,48±0,1 într-un an. Aceeași tendință s-a observat și în ceea ce privește TcPO2 - la pacienții mai severi s-a remarcat un răspuns mai pronunțat la terapie (o creștere de 35,2% după 90 de zile și 32,5% după un an).

Tabelul 4. Rezultatele utilizării unui medicament bazat pe un acid nucleic (Neovasculgen) care codifică VEGF în terapia conservatoare complexă [21] .

* diferențe semnificative statistic față de valoarea inițială
' diferențe semnificative statistic între 90 de zile. și 1 an (p≤0,05, testul Wilcoxon neparametric).

Note

1. ↑ Hockel M., Schlenger K., Doctrow S. colab. Angiogeneza terapeutică. Arch Surg. 1993; 128:423-9.
2. ↑ Schwalb P. G., Gavrilenko A. V. , Kalinin R. E. et al. Eficacitatea și siguranța Neovasculgenului în terapia complexă a pacienților cu ischemie cronică a extremităților inferioare (faza IIb-III a studiilor clinice) . Transplantologie celulară și inginerie tisulară . 2011; 3:76-83.
3. ↑ Mzhavanadze N.D., Bozo I.Ya., Kalinin R.E., Deev R.V. Realități și perspective pentru utilizarea terapiei genice în chirurgia cardiovasculară Transplantologie celulară și inginerie tisulară . 2012; 2:51-5.
4. ↑ Isner J., Walsh K., Symes J. și colab. Terapia genică arterială pentru angiogeneza terapeutică la pacienții cu boală arterială periferică. circulaţie. 1995; 91:2687-92.
5. ↑ Isner J., Pieczek A., Schainfeld R., Blair R. și colab. Dovezi clinice de angiogeneză după transferul de genă arterială a phVEGF165 la pacientul cu membru ischemic. Lancet 1996 Aug 10;348(9024):370-4.
6. ↑ Baumgartner I., Rauh G., Pieczek A. et al. Edemul la nivelul extremităților inferioare asociat cu transferul de gene al ADN-ului gol care codifică factorul de creștere endotelial vascular. Ann Intern Med. 2000; 132(11):880-4.
7. ↑ 1 2 3 Klabukov I.D., Balyasin M.V., Lundup A.V., Krasheninnikov M.E., Titov A.S., Mudryak D.L., Shepelev A.D., Tenchurin T.Kh. ., Chvalun S.N., Dyuzheva T.G. Vitalizarea angiogenică a matricei biocompatibile și biodegradabile (studiu experimental in vivo)  // Fiziologie patologică și terapie experimentală. - 2018. - T. 62 , Nr. 2 . - S. 53-60 . — ISSN 0031-2991 . Arhivat din original pe 26 iunie 2018. (Rusă)
8. ↑ 1 2 Madeddu P. Angiogeneza și vasculogeneza terapeutică pentru regenerarea țesuturilor. fiziologie experimentală. 2004; 90:315-26.
9. ↑ Mäkinen K. Angiogenesis — un nou obiectiv în terapia bolii ocluzive ale arterelor periferice. Acta Chir Belg. 2003; 103:470-4.
10. ↑ Malecki M., Kolsut P., Proczka R. Terapia genică angiogenică și antiangiogenă. Terapia genică. 2005; 12:159-69.
11. ↑ 1 2 Li W., Li V. Angiogeneza în vindecarea rănilor. Chirurgie contemporană. Un supliment pentru chirurgia contemporană. 2003; 36.
12. ↑ Azrin M. Angiogeneza, livrarea proteinelor și a genelor. British Medical Bulletin 2001; 59:211-25.
13. ↑ Sylven C. Terapia genică angiogenă. Drogurile de azi. 2002; 38:819-27.
14. ↑ 1 2 3 Parfenova E. V., Tkachuk V. A. Angiogeneza terapeutică: realizări, probleme, perspective. Buletinul de Cardiologie. 2007; 2:5-15.
15. ↑ Isner J., Vale P., Losordo D. și el. Angiogeneza și bolile cardiovasculare. Dialoguri în medicina cardiovasculară, 2001:3:145-70.
16. ↑ Grigoryan A.S., Shevchenko K.G. Posibile mecanisme moleculare de funcționare a constructelor plasmide care conțin gena VEGF . Transplantul celular și ingineria tisulară. 2011; 6 (3):24-8.
17. ↑ 1 2 3 Deev R. V., Chervyakov Yu. V., Kalinin R. E. și colab. Aspecte teoretice și practice ale utilizării unui medicament bazat pe un acid nucleic care codifică factorul de creștere vasculară endotelială („Neovasculgen”). Angiologia.ru. 2011; unu.
18. ↑ Meyer F., Finer M. Terapia genică: progres și provocări. Cell Moi Biol (Noisy-le-grand). 2001; 47:1277-94.
19. ↑ Reshetov I.V., Zalyanin A.S., Filippov V.V., Kharkova N.V., Sukortseva N.S., Popov V.K., Mirtov A.V., Komlev V.S. Modalități de vitalizare a structurilor bioinginerești pentru restaurarea sistemului locomotor (în cadrul grantului RFBR pe tema „Studiul modalităților de vascularizare și inervare a implanturilor individuale 3D pentru restaurarea sistemului musculo-scheletic”)  // Cap și gat 1/2. - 2016. - Mai. - S. 55-59 . — ISSN 2310-5194 . Arhivat din original pe 27 iunie 2018.
20. ↑ Deev, R. V., Drobyshev, A. Yu., Bozo, I. Ya., Galetsky, D. V., Korolev, V. O., Eremin, I. I., ... & Isaev, A A. (2013). Crearea și evaluarea acțiunii biologice a unui material osteoplastic activat de gene care poartă gena VEGF umană Arhivat 26 iunie 2018 la Wayback Machine . Genes and Cells , 8 (3), 78-85.
21. ↑ Deev R.V., Kalinin R.E., Chervyakov Yu.V. Buletinul Centrului National Medical si Chirurgical. N. I. Pirogov. 2011; 4:20-5.

Literatură

1. Hockel M., Schlenger K., Doctrow S. colab. Angiogeneza terapeutică. Arch Surg. 1993; 128:423-9.
2. Shvalb P. G., Gavrilenko A. V. , Kalinin R. E. și colab. Eficacitatea și siguranța Neovasculgenului în terapia complexă a pacienților cu ischemie cronică a extremităților inferioare (faza IIb-III a studiilor clinice). KTTI. 2011; 3:76-83.
3. Mzhavanadze N.D., Bozo I.Ya., Kalinin R.E., Deev R.V. Realități și perspective de utilizare a terapiei genice în chirurgia cardiovasculară. CTTI 2012; 2:51-5.
4. Isner J., Walsh K., Symes J. şi colab. Terapia genică arterială pentru angiogeneza terapeutică la pacienții cu boală arterială periferică. circulaţie. 1995; 91:2687-92.
5. Isner J., Pieczek A., Schainfeld R., Blair R. et al. Dovezi clinice de angiogeneză după transferul de genă arterială a phVEGF165 la pacientul cu membru ischemic. Lancet 1996 Aug 10;348(9024):370-4.
6. Baumgartner I., Rauh G., Pieczek A. et al. Edemul la nivelul extremităților inferioare asociat cu transferul de gene al ADN-ului gol care codifică factorul de creștere endotelial vascular. Ann Intern Med. 2000; 132(11):880-4.
7. Madeddu P. Angiogeneza si vasculogeneza terapeutica pentru regenerarea tesuturilor. fiziologie experimentală. 2004; 90:315-26.
8. Mäkinen K. Angiogeneza - un nou obiectiv în terapia bolii ocluzive ale arterelor periferice. Acta Chir Belg. 2003; 103:470-4.
9. Malecki M., Kolsut P., Proczka R. Terapia genică angiogenică și antiangiogenă. Terapia genică. 2005; 12:159-69.
10. Li W., Li V. Angiogeneza în vindecarea rănilor. Chirurgie contemporană. Un supliment pentru chirurgia contemporană. 2003; 36.
11. Azrin M. Angiogeneza, livrarea de proteine ​​și gene. British Medical Bulletin 2001; 59:211-25.
12. Sylven C. Terapia genică angiogenă. Drogurile de azi. 2002; 38:819-27.
13. Parfenova E. V., Tkachuk V. A. Angiogeneza terapeutică: realizări, probleme, perspective. Buletinul de Cardiologie. 2007; 2:5-15.
14. Isner J., Vale P., Losordo D. și el. Angiogeneza și bolile cardiovasculare. Dialoguri în medicina cardiovasculară, 2001:3:145-70.
15. Grigoryan A.S., Shevchenko K.G. Posibile mecanisme moleculare de funcționare a constructelor plasmide care conțin gena VEGF . CTTI 2011; 6 (3):24-8.
16. Deev R. V., Chervyakov Yu. V., Kalinin R. E. și colab. Aspecte teoretice și practice ale utilizării unui medicament bazat pe un acid nucleic care codifică factorul de creștere vasculară endotelial ("Neovasculgen"). Angiologia.ru. 2011; unu.
17. Meyer F., Finer M. Terapia genică: progres și provocări. Cell Moi Biol (Noisy-le-grand). 2001; 47:1277-94.
18. Baumgartner I., Pieczek A., Manor O. et al. Expresia constitutivă a phVEGF165 după transferul intramuscular de genă promovează dezvoltarea vaselor colaterale la pacienții cu ischemie critică a membrelor. Tiraj 1998; 97:1114-23.
19. Symes J., Losordo D., Vale P. et al. Terapia genică cu factor de creștere endotelial vascular pentru boala coronariană inoperabilă. Ann Thorac Surg 1999; 68:830-36.
20. Fortuin F., Vale P., Losordo D. et al. Urmărirea timp de un an a transferului direct de gene miocardice a factorului 2 de creștere a endoteliului vascular utilizând acid dezoxiribonucleic plasmid nu prin toracotomie la pacienții fără opțiune. Sunt J Cardiol. 2003; 92:436-9.
21. Reilly J., Grise M., Fortuin F. et al. Evenimente clinice pe termen lung (2 ani) în urma transferului de gene intramiocardice transtoracice de VEGF-2 la pacienții fără opțiune. J Interv Cardiol. 2005; 18:27-31.
22. Vale P., Losordo D., Milliken C. et al. Cartografierea electromecanică a ventriculului stâng pentru a evalua eficacitatea transferului de gene phVEGF (165) pentru angiogeneza terapeutică în ischemia miocardică cronică. Tiraj 2000; 102:965-74.
23. Sarkar N., Ruck A., Kallner G. şi colab. Efectele injectării intramiocardice de phVEGF-A165 ca terapie unică la pacienții cu boală coronariană refractară - urmărire la 12 luni: terapie genică angiogenă. J Intern Med. 2001; 250:373-81.
24. Losordo D., Vale P., Hendel R. et al. Studiu de fază 1/2 controlat cu placebo, dublu-orb, cu creșterea dozei, a transferului de gene a factorului 2 de creștere a endoteliului vascular miocardic prin livrarea cateterului la pacienții cu ischemie miocardică cronică. Tiraj 2002; 105:2012-18.
25. Gyongyosi M., Khorsand A., Zamini S. et al. Analiza ghidată de NOGA a anomaliilor regionale de perfuzie miocardică tratate cu injecții intramiocardice de plasmidă care codifică factorul de creștere a endoteliului vascular A-165 la pacienții cu ischemie miocardică cronică: subanaliza studiului randomizat dublu-orb multicentric EUROINJECT-ONE. Tiraj 2005; 112 (Supliment): I157-I165.
26. Kastrup J., Jorgensen E., Ruck A. şi colab. Terapia genică cu factor de creștere a endoteliului vascular plasmid intramiocardic direct-A165 la pacienții cu angină pectorală severă stabilă. Un studiu randomizat, dublu-orb, controlat cu placebo: Euroinject One Trial. J Am Call Cardiol. 2005; 45:982-8.
27. Stewart D., Kutryk M., Fitchett D. și colab. Terapia genică VEGF nu reușește să îmbunătățească perfuzia miocardului ischemic la pacienții cu boală coronariană avansată: rezultatele studiului NORTHERN. Mol. Acolo. 2009; 17:1109-15.
28. Mendiz O., Favaloro L., Diez M. et al. Rezumat 15235: transfer de genă VEGF plasmid în doză mare la pacienții cu boală coronariană severă: rezultatele finale ale primului studiu din America Latină de terapie genică în ischemia miocardică. Tiraj 2011; 124 (Supliment): A15235.
29. Kusumanto Y., van Weel V., Mulder N. et al. Tratamentul cu gena factorului de creștere a endoteliului vascular intramuscular în comparație cu placebo pentru pacienții cu diabet zaharat și ischemie critică a membrelor: un studiu randomizat dublu-orb. Hum Gene Ther 2006; 17:683-91.
30. Kukula K., Chojnowska L., Dabrowski M. et al. Factorul de creștere a endoteliului vascular uman care codifică plasmide intramiocardice A165/ terapia de bază a factorului de creștere a fibroblastelor folosind abordarea transcateterică percutanată la pacienții cu boală coronariană refractară (VIF-CAD). Am Heart J 2011; 161:581-9.
31. Makinen K., Manninen H., Hedman M. şi colab. Vascularitate crescută detectată prin angiografia digitală cu scădere după transferul genei VEGF în artera membrelor inferioare umane: un studiu de fază II randomizat, controlat cu placebo, dublu-orb. Mol Ther 2002; 6:127-33.
32. Hedman M., Hartikainen J., Syvanne M. şi colab. Siguranța și fezabilitatea transferului de gene a factorului de creștere endotelial vascular intracoronar local pe cateter în prevenirea postangioplastiei și restenozei în stent și în tratamentul ischemiei miocardice cronice: rezultatele de fază II ale studiului Kuopio Angiogenesis Trial (KAT). Tiraj 2003; 107:2677-83.
33. Rajagopalan S., Mohler III E., Lederman R. et al. Angiogeneza regională cu factor de creștere endotelial vascular (VEGF) în boala arterială periferică: proiectarea studiului RAVE. Am Heart J 2003; 145:1114-18.
34. Rosengart T., Lee L., Patel S. et al. Terapia genică a angiogenezei: evaluarea de fază I a administrării directe intramiocardice a unui vector de adenovirus care exprimă ADNc VEGF121 la indivizi cu boală coronariană severă semnificativă clinic. Tiraj 1999; 100:468-74.
35. Stewart D., Hilton J., Arnold J. et al. Terapia genică angiogenă la pacienții cu boală cardiacă ischemică nerevascularizabilă: un studiu de fază 2 randomizat, controlat de AdVEGF (121) (AdVEGF121) versus tratament medical maxim. Terapia genică 2006; 13:1503-11.
36. Kastrup J., Jorgensen E., Fuchs S. şi colab. Un studiu multicentric, randomizat, dublu-orb, controlat cu placebo, privind siguranța și eficacitatea terapiei genice BIOBYPASS (AdGVVEGF121.10NH) la pacienții cu boală coronariană avansată refractară: studiul NOVA. Euro Intervention 2011; 6:813-18.
37. Ropper A., ​​​​Gorson K., Gooch C. și colab. Transferul genetic al factorului de creștere endotelial vascular pentru polineuropatia diabetică: un studiu randomizat, dublu-orb. Ann Neurol 2009; 65:386-93.
38. Deev R. V., Kalinin R. E., Chervyakov Yu. V. și colab.. Rezultatele utilizării medicamentului de terapie genică „Neovasculgen” la pacienții cu ischemie cronică a extremităților inferioare: 1 an de urmărire. Buletinul Centrului National Medical si Chirurgical. N. I. Pirogov. 2011; 4:20-5.
39. Schwalb P. G., Kalinin R. E., Gryaznov S. V. și colab. Siguranța și eficacitatea pe termen scurt a unui medicament de terapie genică la pacienții cu ischemie cronică a membrelor inferioare. Cardiologie și chirurgie cardiovasculară. 2011; 4:61-6.