Analiza microbiologică a solurilor - analiza solurilor , efectuată pentru a determina prezența bacteriilor în sol, tipurile și numărul acestora.
Probele de sol trebuie prelevate folosind miezuri cu un diametru de aproximativ 10 mm până la o adâncime de 10-20 cm. Este mai bine să pre-sterilizezi miezurile în apă clocotită (100 ° C).
Probele trebuie plasate în vase Petri sterile , care apoi trebuie sigilate. ½ din greutatea fiecărei probe este de obicei luată pentru analiză chimică (studiul concentrației ionilor care conțin azot), restul merge la analiza microbiologică.
Activitatea microbiologică a solurilor poate fi determinată de activitatea de protează a microorganismelor vii din sol , iar activitatea de protează a solurilor este determinată de activitatea exoenzimelor microorganismelor din sol și depinde de numărul și activitatea acestora. Exoenzimele sunt enzime secretate de microorganisme în mediul extern care descompun proteinele, polizaharidele și lipidele.
În vasele Petri cu mostre de sol, trebuie să plasați o peliculă fotografică iluminată tăiată în 2-3 cadre, înmuiată în prealabil în apă timp de 10 minute. Apa trebuie presterilizată prin fierbere timp de 10 minute (100 °C). De asemenea, este mai bine să plasați un fragment de film într-o cutie Petri sterilă goală (martor) pentru a compara rezultatele obținute cu controlul la sfârșitul experimentului și pentru a minimiza riscul de erori.
Apoi, probele de sol trebuie păstrate la temperatura camerei (20 °C) timp de 9 zile. Apoi filmul trebuie îndepărtat cu grijă și spălat sub jet de apă, apoi uscat. După aceea, trebuie să calculați procentul stratului de emulsie „mâncat” pe paletă. Cu cât procentul de distrugere a stratului de emulsie este mai mare, cu atât activitatea exoenzimatică a solului este mai mare.
O caracteristică a colorației Gram este raportul inegal dintre diferiți microbi și coloranții din grupa trifenilmetanului: violet de gențiană, violet de metil , violet cristal. Microbii aparținând grupului gram-pozitiv oferă o legătură puternică cu coloranții indicați și iodul . Microbii pătați nu se decolorează atunci când sunt expuși la alcool , drept urmare, atunci când sunt colorați suplimentar cu fucsin , microbii gram-pozitivi nu schimbă culoarea violet adoptată inițial. Microorganismele gram-negative formează cu violetul de gențiană, cristal sau metil și iod un compus care este ușor distrus prin acțiunea alcoolului, în urma căruia se decolorează și apoi se colorează cu fucsină, căpătând o culoare roșie. Raportul dintre microorganisme și colorația Gram este de mare valoare diagnostică.
O cantitate mică de probă de sol trebuie inoculată în plăci Petri cu agar alge folosind o buclă microbiologică, apoi plăcile Petri inoculate trebuie păstrate la temperatura camerei timp de 9 zile. De asemenea, este mai bine să faceți o inoculare de control din aer pentru a compara ulterior coloniile de microorganisme crescute în diferite vase Petri și pentru a ști ce microorganisme ar putea veni din aer, și nu din sol.
Se pune o picătură de apă distilată pe o lamă de sticlă curată, fără grăsimi, apoi se adaugă o cantitate mică de cultură microbiană crescută pe agar folosind o buclă microbiologică. Apoi, trebuie să faceți lovituri și să le fixați pe flacără. Este mai bine să faceți 2-3 frotiuri pentru fiecare probă de sol și un frotiu de control.
Colorarea Gram a microorganismelor trebuie făcută după cum urmează:
Rezultatul colorării: bacteriile gram - pozitive sunt colorate cu colorantul principal într-o culoare violet închis, bacteriile gram-negative, percepând o culoare suplimentară, capătă o culoare purpurie strălucitoare.