Analiza imunocromatografică

Versiunea actuală a paginii nu a fost încă revizuită de colaboratori experimentați și poate diferi semnificativ de versiunea revizuită la 22 ianuarie 2017; verificările necesită 16 modificări .

Analiza imunocromatografică (IHA)  ( ing.  Testul cu flux lateral ) este o metodă imunochimică de analiză bazată pe principiul cromatografiei în strat subțire și care include reacția dintre un antigen și anticorpul corespunzător din materialele biologice. Se realizează folosind benzi de testare speciale, panouri sau casete de testare.

Esența metodei

Principiul de funcționare este că atunci când o bandă de testare este scufundată într-un fluid biologic (sau altă probă lichidă), aceasta începe să migreze de-a lungul benzii conform principiului cromatografiei în strat subțire. Împreună cu ea, anticorpii specifici marcați aplicați în partea de jos a benzii de testare se mișcă, care se leagă prin afinitate de analit.

Există 2 forme de ICA: metoda directă și cea competitivă.

  1. Schema ICA directă (sandwich) utilizează un conjugat anticorp-marcat aplicat pe membrana conjugatului. Pe linia de testare, anticorpii specifici acestui analit au fost imobilizați, iar pe linia de control, anticorpii anti-specie specifici anticorpilor primari. Când se aplică o probă care conține un analit, când proba lovește membrana cu conjugatul, analitul se leagă de conjugatul At-tag. Apoi complexul imun intră în zona de testare, unde se leagă de anticorpi specifici, formând un „sandwich” al etichetei Ab-Ag-Ab. Excesul de conjugat nelegat se leagă de anticorpii anti-specie din linia de control. Astfel, detectarea a 2 linii pe banda de testare este un rezultat pozitiv al testului. În absența unui analit în probă, conjugatul se leagă de anticorpii anti-specie doar pe linia de control, formând o singură linie pe banda de testare. Metoda ICA directă este utilizată pentru a detecta compuși macromoleculari - viruși, inclusiv HIV; diverși hormoni (de exemplu, în testele de sarcină), agenți patogeni ai bolilor infecțioase.
  2. Metoda ICA competitivă utilizată pentru determinarea compușilor cu greutate moleculară mică se bazează pe competiția dintre analit și conjugatul analit imobilizat:proteină purtător pentru un număr limitat de situsuri de legare a anticorpilor specifici conținute în conjugatul At-tag. Când se aplică o probă care conține un analit, aceasta se leagă de conjugatul At-tag de pe membrana cu conjugatul. Apoi, imunocomplexul trece prin zona de testare, unde conjugatul analit:proteină purtătoare este imobilizat. Imunocomplexul nu se poate lega de acest conjugat din cauza obstacolelor sterice: compușii cu greutate moleculară mică au de obicei un determinant antigenic și, în consecință, anticorpii au un loc de legare pentru un antigen care este deja un analit ocupat. Apoi, complexul imun este legat de anticorpi anti-specie care se află pe linia de control. Ca urmare, absența unei benzi colorate în zona de testare și prezența culorii în zona de control indică faptul că concentrația analitului din proba de testat depășește valoarea sa de prag pentru acest test.

În absența unui analit în probă, conjugatul At-tag se leagă de conjugatul Ag:proteină purtătoare imobilizat în zona liniei de testare. Conjugatul At-tag nelegat intră în zona liniei de control și se leagă acolo cu anticorpi anti-specie. Astfel, prezența a două linii colorate (test și control) este un rezultat negativ al analizei.

O formă de ICA competitivă este utilizată pentru a detecta compuși cu greutate moleculară mică, inclusiv metaboliți ai compușilor narcotici din urină, lichid oral și extracte de țesut.

Avantajul metodei este viteza și ușurința în utilizare, posibilitatea utilizării formularelor ICA non-instrumentale cu o evaluare vizuală a rezultatului analizei. În acest caz, nu este nevoie de echipament și analiza poate fi efectuată de un nespecialist în orice condiții, inclusiv „de teren”.

Există, de asemenea, forme instrumentale semi-cantitative și cantitative de ICA, care folosesc cititoare speciale pentru a înregistra intensitatea etichetei în zona de testare a benzii de testare.

Etichete utilizate în IHA

Diferite particule sunt folosite ca etichete în ICA, care au următoarele proprietăți:

  1. Agenți de colorare (nanoparticule de aur coloidal sau carbon, sau particule de latex colorat). În acest caz, se utilizează detectarea vizuală a rezultatului sau determinarea colorimetrică instrumentală (sau scanarea). Utilizarea unor etichete de culoare diferite atașate particulelor de latex permite o analiză multiplă în care linii de culoare diferite corespund unor analiți diferiți. Cea mai des folosită etichetă este nanoparticulele de aur coloidal.
  2. Etichete fluorescente, fosforescente și bioluminiscente legate covalent de particulele de latex. Aceste etichete sunt folosite numai în versiunile instrumentale ale ICA, când rezultatul este înregistrat de un cititor (senzor) special. Dintre cele de mai sus, etichetele fluorescente sunt cele mai comune.
  3. Etichete paramagnetice (atașate și particulelor de latex). Acest tip de marcaje este utilizat în ICA cu utilizarea dispozitivelor care înregistrează puterea câmpului magnetic.
  4. Etichetele enzimelor sunt utilizate în același mod ca în ELISA. Reacția enzimatică este înregistrată prin colorarea substraturilor iar rezultatul analizei este vizual sau citit de un senzor.
  5. O nouă direcție în dezvoltarea diferitelor tipuri de ICA este utilizarea lipozomilor ca purtători ai diferitelor tipuri de etichete (colorante, fluorescente, enzimatice, electroactive etc.).

Literatură

Link -uri