Testul de generare a trombinei este un indicator integral al stării sistemului de coagulare a sângelui .
Trombina este principala enzimă a sistemului de coagulare a sângelui. El catalizează principala reacție a acestui sistem, conversia fibrinogenului în fibrină . În plus, trombina este cea care efectuează reglarea principală a sistemului, activând factorii de coagulare V, VIII, VII, XI, XIII, proteina C, trombocite , inhibitor al fibrinolizei activat de trombină. În cele din urmă (ceea ce este important din punct de vedere practic), în timpul coagulării se formează mai multă trombină (de 10-100 de ori) decât toate celelalte serin proteaze de coagulare combinate. Studiul cineticii trombinei poate oferi o mulțime de informații suplimentare care nu sunt disponibile dintr-o simplă observare a cineticii coagularii. Cheagul de fibrină este doar rezultatul final al procesului de coagulare; este important să-l observați, dar pentru a înțelege mecanismele procesului este necesar să privim mai profund.
Metodele de monitorizare a concentrației de trombine au apărut cu mult timp în urmă: deja în anii 1960, studiile cineticii formării trombinei au fost efectuate foarte activ. Metoda clasică de determinare a concentrației de trombină a fost coagularea: o probă cu o concentrație de trombină necunoscută a fost amestecată cu plasmă nerecalcificată (ca în testul timpului de trombină) și concentrația de trombină a fost determinată din timpul de coagulare. Pentru a reprezenta grafic concentrația trombinei în funcție de curba de timp, probele au fost prelevate la intervale scurte de timp. Măsurarea unei singure curbe a necesitat munca coordonată a doi asistenți de laborator cu înaltă calificare timp de o oră, iar aplicarea clinică largă a metodei a fost de neconceput.
Apariția substraturilor cromogene și apoi fluorogene în anii 1980 a revoluționat studiul coagulării sângelui [1] , [2] . Un astfel de substrat sintetic este o moleculă care este recunoscută și tăiată de serin proteinaza . Această incizie duce la scindarea moleculei semnal, eticheta, din substrat. Eticheta fie modifică densitatea optică a soluției (cromogenă, adică substrat colorant), fie este capabilă să emită fluorescentă atunci când este iluminată (substrat fluorogen). Substraturile de trombină ar putea fi adăugate direct în plasmă și semnalul de coagulare ar putea fi înregistrat. Rata de creștere a semnalului este apoi proporțională cu concentrația de trombinei, astfel încât dependența de timp a trombinei este obținută din curba experimentală prin diferențiere simplă și normalizare la curba standard. Substraturile cromogene timpurii nu erau foarte convenabile pentru măsurarea generării de trombine, deoarece necesitau defibrinare cu plasmă; în caz contrar, aspectul cheagului a interferat cu observarea aspectului moleculei de colorare. Dar substraturile fluorogene, care, atunci când sunt tăiate, au dat o etichetă puternic luminoasă, au făcut posibilă măsurarea generării de trombine direct în plasma obișnuită. Creșterea productivității a fost enormă: în loc ca doi oameni să măsoare aceeași curbă timp de o oră întreagă, o persoană putea să încarce placa cu mostre, să le pună în fluorimetrul cu placă și, într-o oră, să obțină date pe câteva zeci de mostre.
Din anii 1990, o nouă metodă de generare a trombinei a fost utilizată în mod activ în clinică. Dezvoltată și dezvoltată de Konrad Hemker în Țările de Jos, această abordare este folosită din ce în ce mai mult în Europa în fiecare an, iar în ultimii ani a devenit disponibilă aproape în toată lumea, inclusiv în Rusia. O prezentare generală a acestei metode în limba rusă de către creatorul său poate fi găsită în [3] . O curbă caracteristică de generare a trombinei este prezentată în [1] .
De regulă, în ea se disting doi parametri principali: timpul de întârziere (timpul de întârziere a coagulării) și potențialul de trombină endogen (aria de sub curba de generare a trombinei). Numeroase experimente și teste au arătat că acești doi parametri sunt indicatori eficienți ai proceselor patologice.
Ca și în tromboelastografia , rezultatele testului de generare a trombinei depind în mod semnificativ de condițiile experimentale: metoda de activare, concentrația activatorului, utilizarea plasmei sărace sau bogate în trombocite, adăugarea de excipienți. Prin modificarea acestor parametri, este posibilă detectarea unei varietăți de tulburări de coagulare. Activarea standard cu o cantitate mică de factor tisular în plasma slabă este utilizată pentru a detecta anomalii în coagularea plasmei [4] . Este convenabil pentru analiza în masă a probelor, mai ales atunci când acestea trebuie să fie transportate sau congelate. Generarea de trombină în plasmă bogată poate detecta suplimentar tulburările de coagulare a trombocitelor, detectând cu succes o tendință de sângerare în trombastenia Glanzmann, sindromul Bernard-Soulier, luând medicamente antiplachetare [5] . Dacă se adaugă trombomodulină în plasmă , atunci acest test chiar începe să detecteze unele tulburări de hipercoagulare: mutația factorului de coagulare V Leiden, consecințele luării contraceptivelor orale și altele [6] .