Amplificarea mediată de enzimele de nicking

Reacția de amplificare a enzimei Nicking ( NEAR) este o metodă de amplificare a ADN-ului in vitro similară cu reacția în lanț a polimerazei ( PCR) .  Replicarea ADN-ului are loc la o temperatură constantă folosind o polimerază (și o enzimă de tăiere ) pentru a amplifica exponențial ADN-ul într-un interval de temperatură de la 55 °C la 59 °C.

Avantajele potențiale ale NEAR față de PCR sunt viteza crescută și costurile energetice mai mici, caracteristici împărtășite cu alte scheme de amplificare izotermă [2] . Principalul dezavantaj al NEAR în comparație cu PCR este formarea de produși de amplificare nespecifici, care este o problemă comună pentru reacțiile de amplificare izotermă [3] .

Reacția NEAR utilizează endonucleaze naturale sau endonucleaze modificate care introduc o rupere a catenei pe o singură catenă la locul clivajului ADN-ului dublu catenar. Capacitatea unora dintre aceste enzime de a cataliza amplificarea izotermă a ADN-ului a fost dezvăluită, dar nu a fost revendicată în brevetele eliberate pentru enzimele în sine [4] [5] .

Amplificarea mediată de o enzimă de tăiere este folosită pentru a crea biosenzori [6] [7] .

Vezi și

Note

  1. ↑ Tyumentsev A.I., Tyumentseva M.A., Akimkin V.G. Sistemul CRISPR-Cas pentru detectarea ADN-ului virusului John Cunningham (JCPyV) la concentrații ultra-scăzute. Brevet pentru o invenție . - M. : Serviciul Federal pentru Proprietate Intelectuală, 2021. - 21 p.
  2. ↑ Zanoli L., Spoto G. Metode de amplificare izotermă pentru detecția acizilor nucleici în dispozitive microfluidice   // Biosenzori . - 2012. - Vol. 3 , iss. 1 . — P. 18–43 . — ISSN 2079-6374 . - doi : 10.3390/bios3010018 . Arhivat din original pe 12 februarie 2022.
  3. ↑ Eric Tan, Barbara Erwin, Shale Dames, Tanya Ferguson, Megan Buechel. Amplificarea ADN-ului izotermic specific versus nespecific prin polimerază termofilă și activități enzimatice de Nicking   // Biochimie . - 2008. - Vol. 47 , iss. 38 . — P. 9987–9999 . — ISSN 1520-4995 0006-2960, 1520-4995 . doi : 10.1021 / bi800746p . Arhivat din original pe 12 februarie 2022.
  4. ↑ Brevetul SUA 6.191.267. 20 februarie 2001.
  5. ↑ Brevetul SUA 6.660.475. 9 decembrie 2003
  6. ↑ Jingguo Xu, Jia Guo, Sarah Wanjiku Maina, Yumeng Yang, Yimin Hu. Un aptasenzor pentru stafilococul auriu bazat pe reacția de amplificare a enzimei de tăiere și amplificarea cercului rulant  //  Biochimie analitică. - 2018. - Vol. 549 . — P. 136–142 . - doi : 10.1016/j.ab.2018.03.013 .
  7. ↑ Ruo-Nan Zhao, Li-Ping Jia, Zhe Feng, Rong-Na Ma, Wei Zhang. Aptasenzor electrochimiluminiscență ultrasensibil pentru detectarea 8-hidroxi-2′-deoxiguanozină bazat pe eliberarea multi-ADN indusă de țintă și strategia de amplificare a enzimei de tăiere  //  Biosenzori și bioelectronică. - 2019. - Vol. 144 . — P. 111669 . - doi : 10.1016/j.bios.2019.111669 .