Focalizarea izoelectrică ( IEF , engleză IEF ) sau electrofocalizarea este o tehnologie de separare a moleculelor (cel mai adesea proteine ) prin diferența dintre punctele lor izoelectrice . Acesta este un tip de electroforeză de zonă , care se efectuează de obicei într-un gel. O proteină care se află în zona pH -ului sub propriul punct izoelectric va fi încărcată pozitiv și se va deplasa către catod . Ca urmare a mișcării, sarcina moleculei va scădea, iar mișcarea va încetini. Ca urmare, proteinele vor forma benzi clare, iar fiecare proteină va fi localizată în gradientul de pH în funcție de punctul său izoelectric. Această tehnologie face posibilă separarea foarte clară a proteinelor care diferă în punct izoelectric.
Metoda este utilizată pentru a studia proteinele care diferă în valorile punctului izoelectric, adică raportul dintre reziduurile de aminoacizi acide și bazice . Proteinele sunt aplicate pe un gradient de pH imobilizat al unui gel de poliacrilamidă sau agaroză . Focalizarea izoelectrică vă permite să separați proteinele care diferă în puncte izoelectrice cu mai puțin de 0,01. [1] Focalizarea izoelectrică este primul pas în efectuarea electroforezei bidimensionale , în care proteinele sunt mai întâi separate prin puncte izoelectrice și apoi prin greutate moleculară folosind electroforeza pe gel de poliacrilamidă .