PCR cu transcriere inversă

În biologia moleculară , reacția în lanț a polimerazei cu transcripție inversă este denumită în mod obișnuit RT - PCR .  RT-PCR este o metodă de amplificare a unui fragment specific de acid ribonucleic ( ARN ). [unu] 

O moleculă de ARN monocatenar este convertită într-o reacție de transcripție inversă (RT, ing.  RT, transcripție inversă ) în ADN complementar ( ADNc ) și apoi molecula de ADN monocatenar este amplificată folosind PCR tradițională . RT-PCR nu trebuie confundat cu Real - time PCR ( Q - PCR ), care este uneori abreviat incorect ca RT-PCR .  [2]

Descrierea metodei

Transcriptaza inversă este utilizată pentru a converti o secvență de ARN în ADN complementar :

• 1. Reacția primului lanț: ADN-ul complementar ( ADNc ) este format pe un model de ARNm din dNTP de către enzima transcriptază inversă. Componentele de reacţie sunt amestecate cu primer ADN şi tampon de transcriptază inversă timp de o oră la 37°C.
• 2. Reacția celui de-al doilea lanț: După ce transcrierea inversă este finalizată și se formează ADNc pe șablonul ARNm, următoarele cicluri sunt efectuate conform metodei standard PCR .

După 30 de cicluri de amplificare, sunt produse milioane de copii ale secvenței dorite. [2]

Aplicație

RT-PCR este utilizat pentru a detecta molecule de ARN într-o probă cu o regiune de secvență cunoscută complementară unui primer. Amplificarea exponențială prin RT-PCR este o tehnică sensibilă care poate detecta un număr mic de molecule de ARN.

Un exemplu sunt virusurile ARN, cum ar fi virusul imunodeficienței umane (HIV), care este un retrovirus și , prin urmare , utilizează enzima HIV - reverse transcriptaza pentru a sintetiza ADN viral, care este apoi integrat în genomul gazdei . 

De asemenea, RT-PCR este utilizat pe scară largă pentru diagnosticarea bolilor genetice și determinarea semi-cantitativă a moleculelor de ARN specifice într-o celulă sau țesut ca indicator al expresiei genelor corespunzătoare [3] .

Vezi și

• Reacția în lanț a polimerazei (PCR)
• PCR în timp real

Note

1. ↑ Hunt M. (2006) Real time PCR tutorial - Copyright 2006, The Board of Trustees of the University of South Carolina . Consultat la 20 octombrie 2009. Arhivat din original pe 4 octombrie 2009. (nedefinit)
2. ↑ 1 2 Glik B., Pasternak J. Molecular biotechnology. Principii și aplicare. - Moscova: Mir, 2002. - 589 p. — ISBN 5030033289 .
3. ↑ Bustin SA Journal of Molecular Endocrinology, 25 // Cuantificarea absolută a ARNm folosind teste de reacție în lanț a polimerazei cu transcripție inversă în timp real  . - 2000. - P. 169-193.

Literatură

• Glick B., Pasternak J. Biotehnologie moleculară. Principii și aplicare. - Moscova: Mir, 2002. - 589 p. — ISBN 5030033289 .

Dicționare și enciclopedii	mare chinezesc Britannica (online)