Coomassie

Versiunea actuală a paginii nu a fost încă examinată de colaboratori experimentați și poate diferi semnificativ de versiunea revizuită la 30 august 2016; verificările necesită 14 modificări .
Coomassie Brilliant Blue
General
Nume tradiționale CI 42660, CI Acid Blue 83
Brilliant indocianină 6B, Brillantindocyanin 6B
Brilliant Cyanine 6B, Serva Blue R
Chim. formulă C 45 H 44 N 3 NaO 7 S 2 (sare de sodiu)
Proprietăți fizice
Masă molară 825,97 g/ mol
Proprietăți chimice
Solubilitate
 • in apa insolubil în apă rece, ușor solubil în apă fierbinte, solubil în etanol
Clasificare
Reg. numar CAS 6104-59-2
PubChem 61365
Reg. numărul EINECS 228-060-5
ZÂMBETE   [ http://chemapps.stolaf.edu/jmol/jmol.php?model=CCN%28CC1%3DCC%28%3DCC%3DC1%29S%28%3DO%29%28%3DO%29%5BO-%5D% 29C2%3DCC%3DC%28C%3DC2%29C%28%3DC3C%3DCC%28%3D%5BN%2B%5D%28CC%29CC4%3DCC%28%3D%0ACC%3DC4%29S%28%3DO%29% 28%3DO%29%5BO-%5D%29C%3DC3%29C5%3DCC%3DC%28C%3DC5%29NC6%3DCC%3DC%28C%3DC6%29OCC.%5BNa%2B%5D CCN(CC1=CC(= CC=C1)S(=O)(=O)[O-])C2=CC=C(C=C2)C(=C3C=CC(=[N+](CC)CC4=CC(= CC=C4) )S(=O)(=O)[O-])C=C3)C5=CC=C(C=C5)NC6=CC=C(C=C6)OCC.[Na+]]
InChI   InChI=1S/C45H45N3O7S2.Na/c1-4-47(31-33-9-7-11-43(29-33)56(49.50)51)40-23-15-36(16-24- 40) 45(35-13-19-38(20-14-35)46-39-21-27-42(28-22-39)55-6-3)37-17-25-41(26-18- 37)48(5-2)32-34-10-8-12-44(30-34)57(52,53)54;/h7-30H,4-6,31-32H2,1-3H3,(H2,49, 50,51,52,53,54);/q;+1/p-1NKLPQNGYXWVELD-UHFFFAOYSA-M
ChemSpider 55296
Siguranță
Personaj scurt. pericol (H) H201 , H202 , H235+H410
masuri de precautie. (P) P201
Pictograme GHS Pictograma „Butelie de gaz” a sistemului CGSPictograma „Bombă care explodează” a sistemului CGS
NFPA 704 NFPA 704 diamant în patru culori 0 0 0
Datele se bazează pe condiții standard (25 °C, 100 kPa), dacă nu este menționat altfel.
 Fișiere media la Wikimedia Commons

Coomassie Brilliant Blue este numele a doi coloranți trifenilmetan strâns înrudiți, dezvoltați pentru industria textilă, dar acum folosiți pe scară largă în biochimia analitică pentru colorarea proteinelor. Coomassie Brilliant Blue G-250 diferă de R-250 prin faptul că are două grupări metil. Numele „Coomassie” este o marcă înregistrată a Imperial Chemical Industries .

Numele și istoria descoperirii

Numele Coomassie a fost înregistrat la sfârșitul secolului al XIX-lea ca marcă comercială de către Blackley Company pentru coloranții pentru lână. [1] În 1896, în timpul celui de -al patrulea război anglo-ashanti , trupele britanice au ocupat orașul Coomassie (acum Kumasi în Ghana ). În 1918, Levinstein Ltd, proprietarul mărcii Coomassie, a devenit parte a British Dyestuffs, care a fost preluată de Imperial Chemical Industries în 1926. [2] Imperial Chemical Industries în prezent nu produce coloranți, dar rămâne proprietarul mărcii comerciale Coomassie.

Coloranții albaștri pe bază de derivați de sulf ai trifenilmetanului au fost obținuți pentru prima dată în 1913 de Max Weiler, care lucra în orașul Wuppertal (Germania). [3] [4] [5] [6]

Articolele din reviste biochimice adesea nu precizează exact ce colorant „Coomassie” a fost folosit. Lista de culori en:Color Index International conține mai mult de 40 de coloranți care conțin termenul „Coomassie” în nume. Merck Index (ediția a 10-a) Coomassie Blue RL (Acid Blue 92, CI 13390) are o structură complet diferită.

Culoarea vopselei

Sufixul „R” din numele colorantului Coomassie Brilliant Blue R-250 este o abreviere pentru cuvântul Roșu (roșu), deoarece culoarea albastră a colorantului are o ușoară nuanță roșiatică. Varianta de colorant cu sufixul „G” are o ușoară nuanță verzuie. Numerele „250” au indicat puritatea colorantului.

Culoarea coloranților depinde de aciditatea mediului. Colorantul „G” a fost studiat în detaliu. [7] La ​​pH sub 0, colorantul are o culoare roșie și o absorbție maximă la o lungime de 470 nm. La un pH de aproximativ 1, colorantul este verde și maximul de absorbție este de 620 nm. Peste pH 2, colorantul este albastru strălucitor cu un maxim de absorbție la 595. La pH 7, colorantul are un coeficient de extincție molar de 43.000 M −1 cm −1 . [7]

O modificare a culorii soluției corespunde unei modificări a încărcăturii moleculei de colorant. În forma roșie, cei trei atomi de azot sunt încărcați pozitiv. Cele două resturi de acid sulfuric au un pKa foarte scăzut și , prin urmare, sunt de obicei încărcate negativ, astfel încât la pH aproape de zero, colorantul este un cation cu o sarcină netă de +1. Culoarea verde corespunde unei molecule neîncărcate. La pH 7, doar atomul de azot din difenilamină are o sarcină pozitivă, deci molecula în ansamblu este un anion cu o sarcină totală de -1. Valorile pKa necesare pentru a pierde doi protoni sunt 1,15 și 1,82. Ultimul proton este detașat într-un mediu alcalin, iar molecula capătă o culoare roz ( pK a 12,4). [7]

Coloranții formează un complex cu detergenți anionici, cum ar fi laurilsulfatul de sodiu . [8] Formarea unui astfel de complex stabilizează culoarea verde a formei neutre a colorantului. Acest efect poate afecta determinarea concentrației folosind metoda Bradford . Este probabil ca detergenții anionici să concureze cu colorantul pentru legarea proteinelor.

Utilizare în biochimie

Coomassie Brilliant Blue R-250 a fost folosit pentru colorarea proteinelor în 1964 [9] . Probele de proteine ​​au fost separate prin electroforeză pe o foaie de acetat de celuloză . Foaia a fost plasată în acid sulfosalicilic pentru a fixa proteinele și apoi transferată în soluția de colorant.

În 1965, Coomassie Brilliant Blue R-250 a fost folosit pentru a colora proteinele după separarea electroforetică a gelului de poliacrilamidă [10] . Gelul a fost plasat într-o soluție de colorant care conține metanol, acid acetic și apă. După colorarea cu proteine, gelul de poliacriamidă (PAAG) a trebuit să fie spălat electroforetic. S-a arătat în continuare că gelul poate fi spălat cu o soluție de acid acetic.

Colorantul „G” a fost folosit pentru prima dată pentru vizualizarea proteinelor într-un gel de poliacrilamidă în 1967 , când colorantul a fost dizolvat într-o soluție de acid acetic cu metanol [11] .

Ulterior s-a demonstrat că benzile proteice pot fi colorate fără colorant coloidal „G”, în soluție de acid tricloracetic fără metanol. Utilizarea acestui protocol nu necesită spălarea gelului [12] .

Protocoalele moderne folosesc forma coloidală a colorantului „G” într-o soluție care conține acid fosforic, etanol (sau metanol) și sulfat de amoniu [13] [14] [15] [16] .

Metoda Bradford folosește proprietățile spectrale ale Coomassie Brilliant Blue G-250 pentru a determina cantitatea de proteină în soluție [17] . Pentru a face acest lucru, la proba de proteină se adaugă o soluție de colorant în acid fosforic și etanol. În condiții acide, colorantul este maro, dar atunci când este legat de proteine, devine albastru. Absorbția optică a soluției este măsurată la o lungime de undă de 595 nm.

Legarea unei proteine ​​la un Coomassie Brilliant Blue G-250 încărcat negativ conferă o sarcină negativă proteinei, care poate fi utilizată pentru a separa amestecuri de proteine ​​în PAAG în condiții nedenaturante folosind metoda Blue Native PAGE [18] [19] .

Mobilitatea complexului într-un gel de poliacrilamidă depinde de mărimea proteinei, complexul proteic și cantitatea de colorant legat de proteină.

Vezi și

Note

  1. ↑ Fox, MR Dye-makers of Great Britain 1856-1976: A History of Chemists, Companies, Products and  Changes . - Manchester: Imperial Chemical Industries, 1987. - P. 38.
  2. ↑ Fox, MR Dye-makers of Great Britain 1856-1976: A History of Chemists, Companies, Products and  Changes . - Manchester: Imperial Chemical Industries, 1987. - P. 259.
  3. ↑ Index de culoare  (nedefinit) . — al 3-lea. - Bradford: Society of Dyers and Colorists, 1971. - V. 4. - S. 4397-4398. Copie arhivată (link indisponibil) . Data accesului: 27 mai 2013. Arhivat din original la 19 iulie 2011. 
  4. ↑ , "Procédé de production de colorants de la série du triarylméthane", brevet FR 474260 , emis în 16-02-1915
  5. ↑ Weiler, Max, „Blue Triphenylmethane Dye”, brevet american 1218232 , emis în 1917-03-06
  6. ↑ , „Manufacture of Triarylmethane-dyestuffs”, brevet GB 275609 , emis în 1927-11-03
  7. ↑ 1 2 3 Chial, HJ; Thompson, HB; Splittgerber, AG Un studiu spectral al formelor de sarcină ale Coomassie Blue G  // Biochimie  analitică : jurnal. - 1993. - Vol. 209 , nr. 2 . - P. 258-266 . - doi : 10.1006/abio.1993.1117 . — PMID 7682385 .
  8. ↑ Compton, SJ; Jones, CG Mecanismul răspunsului colorantului și interferența în testul proteinei Bradford   // Biochimie analitică : jurnal. - 1985. - Vol. 151 , nr. 2 . - P. 369-374 . - doi : 10.1016/0003-2697(85)90190-3 . — PMID 4096375 .
  9. ↑ Fazekas de St. Groth, S.; Webster, R.G.; Datyner, A. Două noi proceduri de colorare pentru estimarea cantitativă a proteinelor pe benzi electroforetice   // Biochimica et Biophysica Acta : jurnal. - 1963. - Vol. 71 . - P. 377-391 . - doi : 10.1016/0006-3002(63)91092-8 . — PMID 18421828 .
  10. ↑ Meyer, T.S.; B. B.  B. B. B. R.  250 : jurnal. - 1965. - Vol. 107 , nr. 1 . - P. 144-145 . - doi : 10.1016/0304-4165(65)90403-4 . — PMID 4159310 .
  11. ↑ Altschul, A.M.; Evans, WJ Electroforeza zonei cu gel de poliacrilamidă  (engleză)  // Methods in Enzymology  : journal. - 1967. - Vol. 11 . - P. 179-186 . - doi : 10.1016/S0076-6879(67)11019-7 . . Page 184 comunicare personală de la WJ Saphonov.
  12. ↑ Dizel, W.; Kopperschlager, G.; Hofmann, E. O procedură îmbunătățită pentru colorarea proteinelor în geluri de poliacrilamidă cu un nou tip de Coomassie Brilliant Blue  // Biochimie  analitică : jurnal. - 1972. - Vol. 48 , nr. 2 . - P. 617-620 . - doi : 10.1016/0003-2697(72)90117-0 . — PMID 4115985 .
  13. ↑ Neuhoff, V.; Stamm, R.; Eibl, H. Fundal clar și colorarea proteinelor extrem de sensibile cu coloranți Coomassie Blue în geluri de poliacrilamidă: o analiză sistematică  //  Electrophoresis : journal. - 1985. - Vol. 6 , nr. 9 . - P. 427-448 . - doi : 10.1002/elps.1150060905 .
  14. ↑ Candiano, G.; Bruschi, M.; Musante, L.; Santucci, L.; Ghiggeri, G.M.; Carnemolla, B.; Orecchia, P.; Zardi, L.; Righetti, PG Argint albastru: o colorare coloidală foarte sensibilă Coomassie G-250 pentru analiza proteomului  //  Electroforeza : jurnal. - 2004. - Vol. 25 , nr. 9 . - P. 1327-1333 . - doi : 10.1002/elps.200305844 . — PMID 15174055 .
  15. ^ Steinberg, T. H. Metode de colorare a gelului de proteine: o introducere și o prezentare generală  // Methods in Enzymology  : journal  . - 2009. - Vol. 463 . - P. 541-563 . - doi : 10.1016/S0076-6879(09)63031-7 . — PMID 19892191 .
  16. ↑ Pink, M.; Verma, N.; Rettenmeier, A.W.; Schmitz-Spanke, S. Protocol de colorare CBB cu sensibilitate mai mare și compatibilitate cu spectrometria de masă  //  Electroforeza : jurnal. - 2010. - Vol. 31 , nr. 4 . - P. 593-598 . - doi : 10.1002/elps.200900481 . — PMID 20162584 .
  17. ↑ Bradford, MM și metodă sensibilă pentru micro- cantități de proteine  . : jurnal. - 1976. - Vol. 72 . - P. 248-254 . - doi : 10.1016/0003-2697(76)90527-3 . — PMID 942051 .
  18. ↑ Schägger, H.; Jagow, G. Electroforeza nativă albastră pentru izolarea complexelor proteice membranare în formă activă enzimatic  // Biochimie  analitică : jurnal. - 1991. - Vol. 199 , nr. 2 . - P. 223-231 . - doi : 10.1016/0003-2697(91)90094-A . — PMID 1812789 .
  19. ↑ Wittig, I.; Braun, HP; Schägger, H. Blue native PAGINA   // Nature Protocols : jurnal. - 2006. - Vol. 1 , nr. 1 . - P. 418-428 . - doi : 10.1038/nprot.2006.62 . — PMID 17406264 .

Literatură

Protocoale