Geloza cu ciocolată ( agar sânge cald învechit ) este un mediu nutritiv îmbogățit cu sânge lizat la temperatură ridicată sau hemoglobină , care este utilizat pentru izolarea și cultivarea bacteriilor patogene cu cerințe nutriționale ridicate [1] [2] . Mediul nutritiv este numit pentru culoarea sa caracteristică și nu conține ciocolată sau cacao . În mod convențional, agar cu ciocolată poate fi numit un tip de agar cu sânge , cu toate acestea, aceste medii diferă în funcție de scop și metodă de preparare.
O gamă largă de medii nutritive dense utilizate în microbiologie este folosită ca bază a agarului cu ciocolată [3] . Se adaugă 5-10% din sânge de animal la baza sterilă topită și se încălzește într- o baie de apă la o temperatură de aproximativ 80 ° C timp de 5 minute pentru a liza eritrocitele și a inactiva enzimele care distrug factorul de creștere V. În unele cazuri, de exemplu, când se folosește sânge de la porci sau capre, temperatura de încălzire poate fi de 100 °C, iar timpul de încălzire este crescut la 15 minute [4] .
Adesea, în loc de sânge, o suspensie sterilizată în autoclavă preparată din hemoglobină uscată este utilizată pentru a prepara agar-ciocolată. Datorită faptului că hemoglobina nu este un înlocuitor complet al sângelui, la mediul nutritiv care conține NAD se adaugă suplimente de creștere sintetice , care este necesar pentru creșterea bacteriilor din genul Haemophilus , precum și vitamine și substanțe care stimulează creșterea gonococi și meningococi [3] [5] .
Agar-ciocolata este folosit pentru a cultiva bacterii pretențioase precum gonococul ( Neisseria gonorrhoeae ) și meningococul ( Neisseria meningitidis ) [6] . În plus, unele bacterii patogene (în special Haemophilus influenzae ) necesită factori de creștere suplimentari V și X [7] , care se găsesc în interiorul globulelor roșii ( eritrocite ). Pentru cultivarea cu succes a unor astfel de bacterii, sunt necesare eritrocite lizate (distruse prin încălzire lentă). O temperatură de 80 °C inactivează, de asemenea, enzimele care ar putea metaboliza NAD ( nicotinamidă adenină dinucleotidă ).
Spre deosebire de agar-sânge, nu are loc hemoliză atunci când microorganismele sunt cultivate pe agar-ciocolată . În același timp, unele microorganisme α- și β-hemolizante care produc peroxid de hidrogen formează zone verzi pe agar ciocolată, asemănătoare α-hemolizei [8] .
Adaosul de bacitracină la agar-ciocolată îl face un mediu de cultură electiv, selectiv pentru genul Haemophilus . Varianta de agar-ciocolată Thayer-Martin conține o serie de antibiotice și este un mediu de cultură electiv pentru cultivarea diplococilor Gram negativi din genul Neisseria .