Cromatografia pe hârtie este o metodă de analiză a compoziției unei probe de testare. A fost descoperit în 1944 de Conston, Gordon, Martin și Sing [1] , care l-au folosit pentru a analiza amestecuri de aminoacizi . Ulterior, Martin și Sing au primit Premiul Nobel pentru descoperirea cromatografiei de partiție. În următorii 10 ani, această metodă a devenit foarte răspândită, dar din 1952 cromatografia pe hârtie a început să fie înlocuită cu o nouă metodă de cromatografie în strat subțire (care este în esență o generalizare a cromatografia pe hârtie). Acesta din urmă s-a dovedit a fi mai eficient datorită vitezei mai mari a experimentului, a adecvării pentru scopuri pregătitoare și a capacităților de detectare mai largi. Prin urmare, acum cromatografia pe hârtie practic nu se mai folosește, iar metodele sale nu au fost îmbunătățite de mult timp.
Cromatografia pe hârtie, ca și cromatografia în general, poate fi împărțită în partiție , adsorbție și schimb ionic , precum și preparativă și analitică . În cromatografia pe hârtie de despărțire, se pot distinge cromatografia normală și cromatografia în fază inversă. În acest din urmă caz (spre deosebire de abordarea normală), faza staționară este mai lipofilă decât faza mobilă. Această metodă este folosită pentru a separa substanțele lipofile.
În PC-ul distributiv, purtătorul de fază staționară este celuloza sub formă de foi de hârtie , care chiar și atunci când este uscată conține o cantitate semnificativă de apă legată . Distribuția are loc între apa legată și solvent, deși sunt prezente și efecte de adsorbție. Pentru BH se folosește hârtie de înaltă calitate, care poate fi modificată în conformitate cu sarcinile stabilite. Se folosește și hârtie din fibră de sticlă , care este rezistentă la substanțele chimice corozive și are o capacitate scăzută de adsorbție.
Una dintre cele mai timpurii moduri de modificare a hârtiei cromatografice este acetilarea . Hârtia astfel obținută este utilizată pentru cromatografia în fază inversă. Mai târziu s-a constatat că această hârtie este potrivită și pentru separarea amestecurilor racemice, deoarece acetatul de celuloză în sine este o substanță chirală și, prin urmare, enantiomerii se deplasează prin ea cu viteze diferite. Siliconii sunt, de asemenea, utilizați ca purtători pentru faza lipofilă staționară .
În cromatografia pe hârtie, substanțele se disting prin poziția lor relativă pe hârtie după ce solventul a parcurs o anumită distanță. O cantitate mică din soluția de amestec (10-20 µl ) care trebuie împărțită este aplicată în punctul marcat pe hârtie și uscată. Locul rezultat se numește punctul de pornire. Hârtia este apoi plasată într-o cameră etanșă și un capăt este scufundat într-un solvent, care este faza mobilă. Sub acțiunea forțelor capilare , solventul se deplasează de-a lungul hârtiei, dizolvând și antrenând componentele probei. Înainte de a începe mișcarea, proba trebuie să fie complet dizolvată, astfel încât rata de dizolvare a componentelor în faza mobilă este unul dintre factorii care determină eficiența separării. După ce solventul a parcurs o anumită distanță, foaia este îndepărtată și uscată. Apoi, petele formate, care pot fi fie vizibile, fie invizibile, sunt detectate și notate.
Raportul dintre distanța parcursă de spot și distanța parcursă de solvent este de obicei notat cu Rf . Această valoare depinde de substanță, hârtie și natura solventului. Cromatogramele de hârtie pot apărea în flux de solvent ascendent, descendent și orizontal, ceea ce are un efect redus asupra calității acestora. Prin urmare, alegerea este determinată de alți factori: comparativ cu cromatografia ascendentă, cromatografia descendentă are anumite avantaje. Și anume, necesită mai puțin timp și nu este limitat de lungimea cursei. Pe de altă parte, pentru coborârea BX, pregătirea atentă a camerei joacă un rol important, deoarece contaminarea sau contactul slab al hârtiei la punctul de contact cu peretele bărcii poate duce la un curent neomogen și, ca urmare, , formarea dungilor.
Bush și Crawshaw au propus tehnica HD rapidă . Această tehnică implică utilizarea camerelor mai înguste, cromatografia orizontală, saturarea atmosferei camerei cu vaporii sistemului de solvent și, cel mai important, pre-impregnarea hârtiei cu o fază staționară apoasă. Adesea foarte eficient este așa-numitul. BH bidimensional , care constă în faptul că după cromatografie într-o direcție, hârtia este uscată și re-cromatografiată cu un alt solvent în unghi drept față de direcția inițială. Acest lucru duce adesea la separarea substanțelor care nu sunt separate în primul solvent.
Petele de pe cromatograme pot fi detectate prin culoare , fluorescență , prin reacții chimice , pentru care hârtia este pulverizată sau scufundată în diverși reactivi , sau prin radioactivitate . Identificarea se realizează de obicei prin comparație cu probe cu valori Rf cunoscute sau după eluare , care constă în tăierea zonei care conține pata și apoi spălarea acesteia cu un solvent adecvat.