| Taq polimeraza | |
|---|---|
| Taq polimeraza în complex cu ADN | |
| Notaţie | |
| Simboluri | polA |
| PDB | 1BGX |
| UniProt | P19821 |
| Alte date | |
| Cod KF | 2.7.7.7 |
| Informații în Wikidata ? | |
Taq polimeraza , sau ADN polimeraza I termostabilă, este o ADN polimerază termostabilă dependentă de ADN a bacteriei Thermus aquaticus . Taq polimeraza este un omolog al ADN polimerazei I de Escherichia coli [1] . Spre deosebire de E. coli , Th. aquaticus este un microorganism termofil (temperatura ambientală de 55 °C și peste este optimă pentru viața sa), prin urmare, enzimele sale sunt termostabile (temperatura optimă este de 70–80 °C) [2] . Taq polimeraza are activități ADN polimerază și 5’,3’- exonuclează și este utilizată pentru reacția în lanț a polimerazei (PCR).
Taq polimeraza a fost caracterizată pentru prima dată în 1976 [3] . Această enzimă este formată din 832 de resturi de aminoacizi și are o greutate moleculară de aproximativ 94 kDa [4] .
O proprietate cheie a polimerazei Taq care o face potrivită pentru PCR este stabilitatea termică. Timpul de înjumătățire al enzimei la 92,5 °C este de 130 de minute, ceea ce permite mai multe cicluri PCR fără a fi nevoie să adăugați o nouă porțiune a enzimei în fiecare ciclu (cum se făcea înainte de descoperirea ADN polimerazelor termostabile). În plus, o temperatură optimă mai mare pentru apariția reacției de amplificare reduce probabilitatea formării structurilor secundare și terțiare în matrice și recoacerea nespecifică a primerilor [2] .
Viteza enzimei depinde de temperatură și este de aproximativ 60 de nucleotide pe secundă la 72 °C. Aceasta este mai mare decât viteza fragmentului Klenov la temperatura sa optimă și se datorează parțial faptului că polimeraza Taq nu are activitate corectivă a exonucleazei 3',5', care încetinește enzima. Polimeraza Taq are o procesivitate mai mare decât fragmentul Klenov și sintetizează cu ușurință fragmente de ADN de 4000 de resturi de nucleotide în lungime, iar în condiții optime - până la 8000-10 000 [2] .
Polimeraza poate adăuga o nucleotidă superioară 3' la capetele contondente ale fragmentului de ADN. Această proprietate a enzimei este utilizată pentru clonarea moleculară [2] .