Un hibridom este o linie celulară hibridă obținută prin fuziunea a două tipuri de celule: limfocite B formatoare de anticorpi obținute din splina unui animal imunizat (cel mai adesea un șoarece) și celule tumorale de mielom . Fuziunea celulară se realizează folosind un agent de distrugere a membranei, cum ar fi polietilenglicolul sau virusul Sendai . Deoarece celulele canceroase de mielom sunt „nemuritoare”, adică capabile să se dividă de un număr mare de ori, după fuziune și selecție adecvată , un hibridom care produce anticorpi monoclonaliantigenul poate fi menținut mult timp. În 1984, Milstein , Köhler și Jerne au primit Premiul Nobel pentru Fiziologie sau Medicină pentru descoperirea principiului obținerii de anticorpi monoclonali .
Animalele de laborator ( mamifere precum șoarecii) sunt imunizate, de obicei prin mai multe injecții de antigen pe o perioadă de 1-2 luni. Celulele sunt apoi obținute din splină, din care sunt izolate limfocitele. Ele sunt fuzionate cu celule de mielom, care sunt alese să nu producă anticorpi pe cont propriu și să nu aibă gena hipoxantin-guanin fosforiboziltransferaza (HGPT), făcându-l susceptibil la agentul de selecție HAT (vezi mai jos). Fuziunea celulară se realizează folosind un agent de distrugere a membranei, cum ar fi polietilenglicolul sau virusul Sendai .
După fuziune, celulele sunt menținute timp de 10-14 zile într-un mediu care conține HAT ( hipoxantina , aminopterina și timidina ). Aminopterina blochează sinteza nucleotidelor, astfel încât celulele mielomului matern mor. Spre deosebire de mielom, celulele hibride și limfocitele B cu gena HHPT supraviețuiesc datorită utilizării hipoxantinei ca sursă de purine , dar durata de viață a limfocitelor obișnuite este limitată și numai celulele hibridom rămân în cultură după câteva săptămâni. Deoarece nu toate sunt formate prin fuziunea mielomului cu limfocitele care produc anticorpii doriti, celulele sunt împărțite în linii, care sunt menținute în celule separate de plăci cu 96 de godeuri. Apoi, anticorpii sunt determinați în mediul de deasupra celulelor și liniile celulare care nu produc anticorpi sau nu se înmulțesc suficient de rapid sunt aruncate. Cu o diluție suficient de bună a suspensiei celulare, nu mai mult de o celulă hibridă intră într-un godeu, dar pentru a asigura calitatea și stabilitatea culturii, liniile celulare selectate pot fi donate din nou, astfel încât anticorpii să fie produși de descendenții unui hibrid. celulă, adică sunt monoclonale [1] .
Cultura de hibridom donat este apoi subcultivată din godeul plăcii cu 96 de godeuri în vase mai mari pentru propagare, depozitare în azot lichid și obținerea mai multor anticorpi pentru studii ulterioare. Din mediul de cultură se pot obține de la 1 la 60 pg/ml de anticorpi monoclonali. O cantitate mai mare poate fi obținută prin injectarea suspensiei celulare în cavitatea abdominală a șoarecilor, unde hibridomul proliferează ca celulele canceroase de mielom matern, secretând anticorpi în lichidul intracavitar cu formarea de ascită (acumulare de lichid în cavitatea abdominală).