Spermograma (din altă greacă σπέρμα - sămânță și γράμμα - înregistrare) este o analiză a ejaculatului (spermatozoizii) folosită în medicină pentru a determina fertilitatea unui bărbat și pentru a identifica posibile boli ale sistemului reproducător. O spermogramă este prescrisă pentru plângerile unui cuplu căsătorit cu privire la infertilitate , o spermogramă este, de asemenea, indicată donatorilor de spermă și persoanelor care planifică crioconservarea spermei .
Componenta principală a spermogramei este analiza microscopică a ejaculatului, în care se determină caracteristicile elementelor celulare ale spermatozoizilor, și anume: numărul de spermatozoizi, motilitatea spermatozoizilor, caracteristicile morfologice ale spermatozoizilor, numărul și tipurile de leucocite, numărul și tipurile de celule imature ale spermatogenezei etc. În plus, parametri macroscopici ai ejaculatului: volumul spermei, culoarea, timpul de lichefiere și vâscozitatea ejaculatului, pH-ul. Uneori, se efectuează o analiză biochimică suplimentară a ejaculatului, în care se examinează cel mai adesea conținutul de fructoză , zinc , alfa-glucozidază , L-carnitină din material seminal .
Ideile despre ce caracteristici are ejaculatul unui bărbat fertil s-au schimbat de-a lungul timpului. Odată cu creșterea calității și cantității de studii la secțiunea de infertilitate masculină, datele despre spermatogeneză sunt revizuite și perfecționate. Propunerile diferiților autori cu privire la normele de volum ejaculat, concentrație și motilitate ale spermatozoizilor sunt prezentate în tabel.
| Autor | An | Volumul, ml | Concentrație, mln/ml | Mobilitate, % |
|---|---|---|---|---|
| Davis | 1943 | patru | 60 | 80 |
| Sharren | 1972 | 2 | 40 | 70 |
| Eliasson | 1981 | 2 | douăzeci | cincizeci |
| Bustos-Obregon | 1981 | 1.5 | douăzeci | 40 |
| Van Zyl | 1976 | 2 | zece | treizeci |
| Standardele OMS | 1999 | 2 | douăzeci | cincizeci |
| Standardele OMS | 2010 | 1.5 | optsprezece | 32 |
În URSS și în prezent în Rusia nu există documente speciale ale Ministerului Sănătății care să stabilească normele pentru ejaculatul fertil. Instituțiile medicale au dreptul de a evalua fertilitatea ejaculatului conform propriilor standarde. Standardele propuse de Organizația Mondială a Sănătății (OMS) sunt foarte populare în rândul medicilor . Prevalența standardelor OMS este atât de mare în rândul medicilor încât aceste standarde pot fi considerate general recunoscute în prezent, iar cartea „WHO Guidelines for the laboratory study of human ejaculate and the interaction of spermatozoa with cervical mucus” este cea mai autorizată publicație. asupra regulilor de efectuare a spermogramelor.
Cea mai recentă ediție a Ghidurilor OMS pentru testarea de laborator a ejaculatului uman și interacțiunea spermatozoizilor cu mucusul cervical (Cambridge University Press, 1999) propune următorii indicatori normativi ai ejaculatului fertil:
| Index | Sens |
|---|---|
| Volum | 2 ml sau mai mult |
| pH | 7.2 sau mai mult |
| Concentrația spermatozoizilor | 20 milioane/ml sau mai mult |
| Numărul total de spermatozoizi | 40 de milioane sau mai mult |
| Motilitatea spermatozoizilor | 50% sau mai mult în mișcare (Categoria A+B) sau 25% sau mai mult progresiv (Categoria A) în 60 de minute de la ejaculare |
| Viabilitatea spermei | 50% sau mai mult în viață |
| Concentrația leucocitelor | mai puțin de 1 milion/ml |
| Anticorpi antisperma | mai puțin de 50% din spermatozoizii asociați ACAT detectați prin MAR sau ImunnoBeat |
OMS nu dă recomandări specifice cu privire la norma privind numărul de spermatozoizi cu morfologie normală, subliniind faptul că studiile valorilor normative pentru spermatozoizi sunt încă în curs.
În 2010, OMS a făcut noi modificări la valorile de referință ale indicatorilor de ejaculat, schimbând metoda de prelucrare și cercetare a acestuia. În cea mai recentă, ediția a V-a a „Manualului de laborator al OMS pentru examinarea și prelucrarea materialului seminal uman”, au fost modificate normele privind numărul și motilitatea spermatozoizilor, numărul formelor normale de spermatozoizi. Deci, de exemplu, clasificarea spermatozoizilor mobili a fost abolită: după grupele a, b, c, d. În schimb, se propune o clasificare a spermatozoizilor cu mișcare progresivă, mișcare neprogresivă și imobil.
Mai jos sunt normele indicatorilor de ejaculare, conform ultimelor recomandări ale OMS din 2010:
| Index | Sens |
|---|---|
| Volumul ejaculat, ml | 1,5 ml sau mai mult |
| Numărul total de spermatozoizi, milioane | 39 și peste |
| Concentrația spermatozoizilor, milioane în 1 ml | 15 sau mai mult |
| Motilitatea totală a spermei, % | 40 sau mai mult |
| Spermatozoizi cu mișcare progresivă, % | 32 sau mai mult |
| Viabilitate, % | 58 și peste |
| Morfologie: forme normale, % | 4 sau mai multe |
Ejaculatul corespunzător valorilor normative acceptate se numește normal, iar starea acestui ejaculat este desemnată prin termenul „normospermie” sau „normozoospermie”.
OMS sugerează următorii termeni pentru a descrie condițiile patologice ale ejaculatului:
Termenii „oligozoospermie”, „astenozoospermie” și „teratozoospermie” în prezența unor anomalii adecvate în ejaculat pot fi combinați într-un singur cuvânt, de exemplu: „oligoastenoteratozoospermie”, „astenoteratozoospermie”, etc.
În plus, următorii termeni sunt comuni:
Uneori pot fi găsiți următorii termeni:
Înainte de a dona spermă pentru analiză, bărbații sunt sfătuiți să se abțină de la activități sexuale și masturbare timp de 2-7 zile. Această perioadă este recomandată pentru standardizarea condițiilor de analiză, astfel încât să puteți compara rezultatele obținute în diferite laboratoare . De asemenea, de obicei se recomandă evitarea consumului excesiv de băuturi alcoolice puternice timp de 2-5 zile (deși efectul alcoolului asupra calității spermei în această perioadă nu a fost demonstrat). De asemenea, cu câteva zile înainte de analiză, trebuie evitate vizitele la saune , băi de aburi , băi termale și alte încăperi cu temperaturi foarte ridicate, deoarece temperaturile ridicate reduc motilitatea spermatozoizilor.
Cel mai comun mod de a obține material seminal pentru analiză este prin masturbare ; această metodă este recomandată de OMS. Alte metode au dezavantaje. Astfel de metode includ: coitus interruptus și utilizarea unui prezervativ medical special fără lubrifiere. Ejaculatul este primit într-un vas oferit de instituția medicală relevantă. De regulă, cupele sterile speciale sunt folosite pentru a colecta secreții biologice lichide ( urină , fecale ). Este posibil să obțineți un ejaculat în afara unei unități medicale cu transport ulterior.
Spermatozoizii normale imediat după ejaculare sunt un coagulat sau pur și simplu un lichid vâscos. În timp, materialul seminal devine lichid. Această perioadă de timp este denumită „timp de lichefiere”. De obicei, ejaculatul se lichefiază în 15-60 de minute. Dacă ejaculatul nu se lichefiază în decurs de 1 oră, atunci, de regulă, nu se mai lichefiază deloc.
Lichefierea ejaculatului este determinată de așa-numita „lungime a firului”. Ejaculatul este atins cu un bețișor de sticlă sau plastic (pipetă) și batonul este ridicat deasupra suprafeței ejaculate; Pentru a determina „lungimea firului” în medicina modernă, ei folosesc adesea eliberarea de ejaculat dintr-o pipetă serologică de 5 ml. „Lungimea firului” caracterizează parametrul „vâscozitate”. Vâscozitatea și timpul de subțiere sunt parametri legați.
Vâscozitatea este conferită spermei de glicoproteina semenogelină, care este produsă în veziculele seminale . Funcțiile semenogelinei nu sunt pe deplin cunoscute, se presupune că se leagă de liganzii de pe suprafața spermatozoizilor și îi menține într-o stare inactivă. În timpul ejaculării , sucul de prostată , care conține așa-numitul „ antigen specific de prostată ”, este amestecat cu spermatozoizi și sucul veziculelor seminale . Această enzimă proteolitică degradează semenogelina, ducând la lichefierea spermei și, probabil, făcând spermatozoizii activi (împreună cu alți factori). Nelichefierea ejaculatului indică o disfuncție a prostatei.
Deoarece vâscozitatea crescută a ejaculatului poate afecta fiabilitatea analizei microscopice, ejaculatul care nu s-a lichefiat în decurs de 1 oră ar trebui să fie lichefiat artificial folosind enzime proteolitice (de exemplu, tripsina farmacopee ).
Volumul ejaculatului se măsoară de obicei cu o pipetă serologică gradată (în același timp se determină vâscozitatea). În majoritatea laboratoarelor, un volum de ejaculat mai mic de 2 ml este considerat anormal, starea unui astfel de ejaculat este caracterizată ca „oligospermie”. Volumul principal al ejaculatului este dat de sucul veziculelor seminale (aproximativ două treimi din volum) și sucul glandei prostatei (aproximativ o treime din volum). Insuficiența volumului ejaculatului poate fi cauzată de ejaculare retrogradă, disfuncție, hipoplazie a veziculelor seminale, disfuncție a prostatei, hipogonadism, obstrucție (completă sau parțială) a canalelor ejaculatoare, o scurtă perioadă de abstinență de la activitatea sexuală înainte de a dona spermatozoizi pentru analiză.
Aciditatea ejaculatului se determină după diluare folosind hârtie indicator sau un pH-metru . OMS recomandă o valoare a pH-ului de cel puțin 7,2 ca indicator normal. Ejaculatul majorității bărbaților are un pH de 7,8-8,0.
Culoarea ejaculatului în medicina modernă nu are o valoare diagnostică serioasă; fixarea sa pe spermogramă este un tribut adus tradiției. Potrivit ideilor tradiționale, un ejaculat normal are o culoare „albicioasă-cenușie”, uneori este caracterizată drept „opalescent”, „alb înnorat”. Un ejaculat clar poate indica (dar nu neapărat) un număr scăzut de spermatozoizi în ejaculat. Ejaculatul gălbui sau roz este uneori asociat cu hemospermia. Trebuie remarcat faptul că analiza microscopică determină cu exactitate numărul de spermatozoizi și celule roșii din sânge din material seminal, deci nu este nevoie să se stabilească culoarea ejaculatului.
Unele laboratoare fixează mirosul de ejaculat. Este caracterizat ca „specific” (în unele cărți de medicină învechite (de exemplu, în „Manualul OMS...”, 1991) este comparat cu mirosul florilor de castan). Mirosul de ejaculat provine din substanța spermina secretată de prostată. Funcțiile sperminei sunt necunoscute. Unii andrologi folosesc mirosul de ejaculat pentru a judeca activitatea secretorie a glandei prostatei, dar valoarea diagnostică a acestei abordări este necunoscută.
Numărul spermatozoizilor este exprimat în termeni relativi ( concentrația sau cantitatea în 1 ml de ejaculat) și în termeni absoluți (cantitatea totală în ejaculat ). De regulă, camerele de numărare sunt utilizate pentru a determina numărul de spermatozoizi - dispozitive care vă permit să observați spermatozoizii într-un anumit volum de lichid la microscop (acest lucru vă permite să determinați numărul de spermatozoizi în 1 ml, adică concentrația , prin operații aritmetice). Pentru a număra spermatozoizii, se folosesc fie camere de numărare pentru celule sanguine - hemacitomeri (" Camera lui Goryaev ", camera "Neubauer"), fie camere speciale de numărare pentru spermatozoizi ("Camera lui Makler", etc.). Există și metode de concentrare rapidă , cum ar fi numărarea spermatozoizilor pe o lamă de sticlă. Dacă o picătură de 10 µl de spermă este acoperită cu o lamă de acoperire de 22×22, atunci numărul de spermatozoizi din câmpul vizual al unui microscop la o mărire de 400 de ori va fi aproximativ egal cu numărul de milioane de spermatozoizi în 1. ml de ejaculat. Există sisteme computerizate pentru determinarea concentrației de spermatozoizi – așa-numitele analizoare de spermă. Un astfel de dispozitiv este un microscop cu o cameră video instalată și un sistem de evaluare a imaginii.
Cu toate metodele de determinare a numărului de spermatozoizi, se obțin mai întâi datele de concentrație. Apoi, prin înmulțirea concentrației cu volumul, se obțin date despre numărul total de spermatozoizi din ejaculat. Potrivit OMS, un ejaculat normal are cel puțin 20 de milioane de spermatozoizi la 1 ml de volum, sau cel puțin 40 de milioane în volum total. Starea ejaculatului cu mai puțini spermatozoizi este caracterizată ca „oligozoospermie”.
Uneori, numărul de spermatozoizi este atât de mic încât nu poate fi exprimat într-o anumită concentrație (de exemplu, medicul a văzut doar câțiva spermatozoizi după ce a examinat mai mult de o probă de ejaculat). În acest caz, se vorbește de „singuri spermatozoizi în câmpul vizual”, „singuri spermatozoizi pe preparat” sau „singuri spermatozoizi în ejaculat”. Uneori, spermatozoizii pot fi detectați doar prin centrifugare a materialului seminal și examinarea sedimentului cu un microscop.
În funcție de motilitate, spermatozoizii sunt împărțiți în 4 categorii: A, B, C și D:
| Categorie | Nume | Caracteristica de mișcare |
|---|---|---|
| Categoria A | Progresiv activ | Deplasați-vă în linie dreaptă cu o viteză de cel puțin 25 microni/s (în două secunde acopera o distanță egală cu lungimea lor) |
| Categoria B | Mișcare progresiv lentă | Deplasați-vă în linie dreaptă cu o viteză mai mică de 25 µm/s |
| Categoria C | mobil neprogresiv | Se mișcă fie indirect, fie pur și simplu se mișcă pe loc |
| Categoria D | nemişcat | nemişcat |
Se crede că spermatozoizii de categoriile A și B pot ajunge în ovul (spermii de categoria B pot crește uneori în viteză după capacitate în vagin și col uterin). Proporția spermatozoizilor de diferite categorii de motilitate se determină fie pe o lamă de sticlă „cu ochi”, fie într-o cameră de numărare, fie cu ajutorul unui analizor de spermatozoizi computerizat.
Conform propunerii OMS, ejaculatul este considerat normal dacă este îndeplinită cel puțin una din cele două condiții: 1) dacă proporția de spermatozoizi din categoria de mobilitate A nu este mai mică de 25%, 2) sau dacă proporția de spermatozoizi din categoriile de mobilitate A iar B în sumă nu este mai mică de 50%. Starea ejaculatului care nu îndeplinește aceste condiții este caracterizată ca „astenozoospermie”.
Analiza normalității morfologice a spermatozoizilor sau pur și simplu „morfologia spermatozoizilor” se realizează cu ajutorul unui microscop. Medicul de laborator stabilește proporția spermatozoizilor al căror aspect corespunde normei și proporția spermatozoizilor cu morfologie anormală. Pentru analiză, fie se folosește spermatozoizi nativi, fie se prepară un frotiu de spermă colorat pe sticlă. Frotiul este colorat cu coloranți histologici, în cel mai simplu caz cu hematoxilină , în cazurile mai complexe, colorarea complexă se efectuează conform metodelor lui Schorr, Papanicolaou sau Romanovsky-Giemsa .
Sperma conține întotdeauna un număr mare de spermatozoizi anormali. Morfologia anormală se poate referi la structura capului (forma anormală, dimensiunea, absența sau acrozomul redus ), structura gâtului și a părții mijlocii (curbură, dimensiune anormală), flagel (curbură, absență sau flageli multipli, dimensiune). OMS nu dă recomandări fără echivoc cu privire la ce procent de spermatozoizi anormali este acceptabil în materialul seminal normal. În ediția din 1992 a „Liniilor directoare...”, s-a pus accent pe recomandarea de a studia morfologia în ejaculatul nativ folosind optica „câmp luminos”; cu această metodă, proporția de spermatozoizi anormali nu trebuie să depășească 50% într-un ejaculat normal. Ediția din 1999 a Ghidurilor OMS a subliniat recomandarea de a examina morfologia ejaculatului nativ folosind optica „contrast de fază”; cu această metodă, proporția de spermatozoizi anormali nu trebuie să depășească 70% într-un ejaculat normal. Dar aceeași publicație recomandă și utilizarea așa-numitelor „criterii stricte Kruger” pentru examinarea morfologiei pe un frotiu de spermă colorat. Conform acestor criterii (aplicabile numai pentru frotiu), proporția spermatozoizilor anormali nu trebuie să depășească 85%. Astfel, stabilirea normelor pentru numărul de spermatozoizi anormali depinde de metoda de evaluare a morfologiei spermatozoizilor. Cea mai precisă metodă este studiul unui frotiu colorat. Starea ejaculatului, care nu îndeplinește standardele pentru morfologia spermatozoizilor, este caracterizată ca „teratozoospermie”.
Viabilitatea spermatozoizilor este caracterizată de proporția de spermatozoizi vii. Spermatozoizii mobili sunt mereu în viață. Un spermatozoid imobil poate fi fie viu, dar cu funcții de mișcare afectate, fie mort. OMS propune ca standard de viabilitate - cel putin 50% din traiul totalului. Astfel, dacă proporția de spermatozoizi mobili (categorii A, B, C) este de 50% sau mai mult, atunci nu este necesar să se efectueze un studiu special de viabilitate. Acest parametru are sens de investigat cu astenozoospermie. Cele mai comune două metode de evaluare a viabilității spermatozoizilor. Ambele metode se bazează pe faptul de încălcare a integrității membranei exterioare a celulei la scurt timp după moartea acesteia:
Celulele rotunjite sau rotunde sunt numite elemente celulare neflagelate ale spermatozoizilor. Cu alte cuvinte, celulele rotunjite sunt tot ceea ce nu sunt spermatozoizi. Acest concept colectiv include două grupe de celule de origine diferită: leucocite și așa-numitele „celule imature ale spermatogenezei”. Conceptul de „celule rotunjite” a apărut deoarece este imposibil să distingem leucocitele de celulele imature de spermatogeneză din ejaculatul nativ folosind microscopia cu lumină. Celulele care sunt atipice pentru ejaculat (eritrocite, celule epiteliale ale canalului deferent etc.) nu sunt clasificate drept „celule rotunde”.
Semnificația diagnostică a parametrului „număr de celule rotunjite” nu este clară. În trecut, OMS a propus o normă de cel mult 5 milioane/ml, justificând-o prin faptul că, dacă numărul de celule rotunjite depășește 5 milioane/ml, este probabil ca conținutul de leucocite să depășească norma (nu mai mult). peste 1 milion/ml). Ulterior, norma „nu mai mult de 5 milioane/ml” a fost anulată.
Celulele imature ale spermatogenezei sunt numite celule din seria spermatogenă, adică precursorii spermatozoizilor. Acestea includ spermatogonia, spermatocitele de ordinul întâi și al doilea și spermatide (vezi spermatogeneza ). Ejaculatul conține întotdeauna celule imature de spermatogeneză, numărul acestora variază foarte mult (de obicei 2-5 milioane / ml, dar poate ajunge la câteva zeci de milioane în 1 ml). Aparent, numărul de celule imature de spermatogeneză nu are valoare diagnostică.
Conform unui punct de vedere comun, un conținut crescut de leucocite în material seminal poate indica prezența unor procese inflamatorii în glandele sexuale accesorii (glanda prostatică, veziculele seminale). Potrivit OMS, un ejaculat normal nu are mai mult de 1 milion de leucocite la 1 ml. Starea ejaculatului cu un număr mare de leucocite este caracterizată ca „leucocitospermie”.
Marea majoritate a leucocitelor din material seminal sunt reprezentate de granulocite segmentate neutrofile . Celelalte tipuri de leucocite din ejaculatul normal sunt rare, astfel încât metodele de detectare a leucocitelor au ca scop identificarea granulocitelor segmentate. În ejaculatul nativ necolorat, este imposibil să distingem în mod fiabil granulocitele de celulele imature de spermatogeneză. Cea mai simplă metodă de detectare a granulocitelor este microscopia unui frotiu de spermă colorat. Este suficient să tratați frotiul de spermă cu orice colorant care pătează nucleul, de exemplu, hematoxilină . Celulele rotunde cu nuclee segmentate sunt definite ca granulocite. Există, de asemenea, metode de colorare a granulocitelor folosind așa-numitul „test peroxidază” - spermatozoidului se adaugă un substrat incolor, care este scindat de peroxidază într-un produs colorat. Granulocitele conțin peroxidază , descompun substratul și colorează galben.
Detectarea leucocitelor este, de asemenea, importantă în diagnosticarea cauzelor azoospermiei . Azoospermia obstructivă se datorează obstrucției canalului deferent, azoospermia secretorie se datorează spermatogenezei suprimate. Cu azoospermia secretorie, celulele imature de spermatogeneză sunt de obicei prezente în ejaculat, cu azoospermia obstructivă, celulele imature de spermatogeneză sunt absente (din cauza obstrucției tractului genital). Dacă cu azoospermie toate celulele rotunde ale ejaculatului sunt determinate ca leucocite, atunci probabilitatea de azoospermie obstructivă este mare.
Anticorpi antisperma [1] (ASAT) sunt numiți anticorpi împotriva antigenelor spermatozoizilor. Astfel de anticorpi pot fi produși atât de corpul unui bărbat, cât și de corpul unei femei. Motivul apariției este contactul sistemului imunitar cu spermatozoizii în boli ale organelor genitale. Anticorpii antispermatici pot provoca infertilitate de natură imunitară. Prin legarea de antigene de pe capul spermatozoizilor, anticorpii antispermatozoizi pot bloca receptorii de legare ai spermatozoidului și ai oului (spermatozoiul nu se poate atașa de membrana celulei ovulului pentru a începe reacția acrozomală). Prin legarea de antigene de pe coada spermatozoizilor, ASAT poate interfera cu mișcarea spermatozoizilor. ACAT provoacă o fragmentare crescută a ADN-ului, patogeneza patospermiei în infertilitatea imună este asociată cu stresul oxidativ.
Un semn comun al prezenței ASAT în spermă este așa-numita „spermaglutinare” - lipirea specifică a spermatozoizilor, lipirea spermatozoizilor unul de celălalt. Spermaglutinarea trebuie distinsă de așa-numita „agregare a spermei” - aglutinare nespecifică datorită prezenței mucusului în material seminal. Spermagregarea este o variantă a normei și nu are semnificație clinică. În timpul spermaglutinării, spermatozoizii mobili formează mici grupuri de legătură - mai mulți spermatozoizi se lipesc împreună cu aceleași părți ale celulei lor - „cap la cap” sau „coadă la coadă” sau „gât la gât”. Aceste grupări de legătură sunt uneori denumite „rozete”. De regulă, numărul de rozete este mic - unul pentru mai multe câmpuri vizuale ale microscopului, dar poate fi și masiv. Celulele rotunjite nu participă la aglutinare și nu sunt incluse în „rozete”. În timpul agregării, spermatozoizii formează grupuri mari (de la zeci la sute). Astfel de grupuri formează adesea o formă de „torn” și includ celule rotunjite.
Există metode imunochimice pentru determinarea ASAT. Cea mai comună în practica modernă de laborator este metoda MAR (Reacția Antiglobulină Mixtă). În această metodă, o picătură dintr-o suspensie de microparticule de silicon legate de anticorpi de iepure împotriva anticorpilor umani este adăugată la o picătură de spermă pe o lamă de sticlă. Astfel de particule se leagă de anticorpii umani. Dacă ASAT este prezent în sperma, atunci particulele se lipesc de spermatozoizi. În acest caz, spermatozoizii cu microparticule atașate sunt observați în câmpul vizual al microscopului. Dacă numărul de spermatozoizi care poartă microparticule depășește 50%, atunci se ajunge la o concluzie despre prezența „anticorpilor antispermatici” în spermă.