Fragment din Klenov

Versiunea actuală a paginii nu a fost încă examinată de colaboratori experimentați și poate diferi semnificativ de versiunea revizuită pe 26 decembrie 2015; verificările necesită 2 modificări .

Fragmentul Klenow este un  fragment proteic mare care rezultă din scindarea enzimatică a ADN polimerazei I din Escherichia coli de către subtilizina protează. Fragmentul Klenow a fost descris pentru prima dată în 1970 și a avut activitate de polimerază 5’ → 3’ în combinație cu activitate exonuclează 3’ → 5’ (corector), dar nu a avut activitate de exonuclează 5’ → 3’ [1] .

Alte fragmente mai mici rezultate din digestia enzimatică ar putea avea activitate 5’ → 3’-exonuclează, dar nu aveau cele două activități caracteristice fragmentului Klenow.

Fragmentul Klenow a fost folosit ca ADN polimerază în primele metode de reacție în lanț a polimerazei [2] și abia după un timp a fost înlocuit cu o polimerază Taq termostabilă [3] .

Utilizat în prezent pentru marcarea ADN-ului („fill-in” 3’ capete scurte cu „hexameri aleatori”), pentru secvențierea ADN-ului prin metoda Sanger și pentru sinteza ADN-ului a doua catenă .

Note

  1. ↑ Klenow H și Henningsen I. Eliminarea selectivă a activității exonucleazei polimerazei acidului dezoxiribonucleic din Escherichia coli B prin proteoliză limitată   // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America  : journal. - 1970. - Vol. 65 . - P. 168-175 . - doi : 10.1073/pnas.65.1.168 . — PMID 4905667 .
  2. ↑ Saiki R.K. și colab. Amplificarea enzimatică a secvențelor genomice de β-globină și analiza locului de restricție pentru diagnosticul anemiei falciforme  (engleză)  // Science : journal. - 1985. - Vol. 230 . - P. 1350-1354 . - doi : 10.1126/science.2999980 . — PMID 2999980 .
  3. ↑ Saiki și colab. Amplificarea enzimatică dirijată de primer a ADN-ului cu o ADN polimerază termostabilă  (engleză)  // Science : journal. - 1988. - Vol. 239 . - P. 487-491 . - doi : 10.1126/science.2448875 . — PMID 2448875 .