Electroforeza proteinelor

Electroforeza proteinelor  este o metodă de separare a unui amestec de proteine ​​în fracții sau proteine ​​individuale, bazată pe mișcarea macromoleculelor de proteine ​​încărcate de diferite greutăți moleculare într-un câmp electric staționar . Electroforeza proteică este utilizată atât pentru a analiza componentele unui amestec de proteine, cât și pentru a obține o proteină omogenă . Cea mai comună variantă de analiză electroforetică a proteinelor este electroforeza în gel de poliacrilamidă Laemmli [2] [3] .

Variante ale metodei electroforezei proteice

Există multe varietăți și modificări ale acestei metode care sunt utilizate (sau au fost utilizate în anumite perioade în dezvoltarea biochimiei și biologiei moleculare ) în diverse domenii [3] :

Electroforeza proteică este, de asemenea, subdivizată în electroforeză unidimensională și bidimensională (2D) [6] , preparativă și analitică, precum și electroforeză proteică nativă și electroforeză în prezența unui detergent (în condiții de denaturare ). O variație a metodei electroforezei este focalizarea izoelectrică și izotachoforeza . În cazul utilizării metodelor imunologice pentru a detecta proteinele separate, se vorbește despre imunoelectroforeză .

În funcție de proiectarea aparatului electroforetic , se disting electroforeza proteică orizontală și verticală.

Istoric și aplicații

După primele experimente cu electroforeză, efectuate în mai multe laboratoare în anii 1930 și 1940, printre care pionierul electroforezei, laureatul Nobel Arne Tiselius [7] , progrese semnificative în dezvoltarea și aplicarea ulterioară a acestei metode de separare a proteinelor au început în 1955 cu dezvoltarea electroforezei zonale pe gel de amidon de către Oliver Smithies , mai târziu și laureat al Premiului Nobel [4] [8] . Metoda a fost îmbunătățită [9] [10] și a devenit utilizată pe scară largă în biochimia experimentală și biologia moleculară.

În 1959 a fost propusă metoda electroforezei proteinelor în PAAG [5] , în 1962 - metoda electroforezei pe disc [11] , în 1969 - utilizarea agenților de denaturare ( SDS ) [12] . În 1970, Laemmli a îmbunătățit semnificativ electroforeza în PAAG, separând 28 de componente proteice ale bacteriofagului T4 [2] . În 1975 a apărut electroforeza bidimensională (2D) [6] .

Electroforeza proteinelor a găsit o largă aplicație în cercetarea biologică, atât fundamentală [2] [4] [13] , cât și aplicată [14] [15] [16] [17] [18] . Un număr de variante ale metodei sunt încă în uz astăzi; de exemplu, electroforeza 2D este una dintre metodele de studiu a proteomului în proteomică [19] .

Vezi și

Note

  1. ↑ Schägger H. , von Jagow G. Electroforeză în gel de tricină-dodecil sulfat de sodiu-poliacrilamidă pentru separarea proteinelor în intervalul de la 1 la 100 kDa  // Analytical Biochemistry  : journal  . - Orlando, FL , SUA : Academic Press , 1987. - Vol. 166, nr. 2 . - P. 368-379. — ISSN 0003-2697 . — PMID 2449095 .  (Data accesării: 27 februarie 2015) Copie arhivată (link nu este disponibil) . Preluat la 13 octombrie 2020. Arhivat din original la 6 aprilie 2018. 
  2. ↑ 1 2 3 Laemmli Marea Britanie . Clivajul proteinelor structurale în timpul asamblării capului bacteriofagului T4  (engleză)  // Nature  : journal. - Londra , Marea Britanie : Nature Publishing Group , 1970. - Vol. 227, nr. 5259 . - P. 680-685. — ISSN 1476-4687 . - doi : 10.1038/227680a0 . — PMID 5432063 . Arhivat din original pe 27 februarie 2015.  (Accesat: 27 februarie 2015)
  3. ↑ 1 2 Osterman L. A. Metode pentru studiul proteinelor și acizilor nucleici: electroforeză și ultracentrifugare (ghid practic). — M .: Nauka , 1981. — 288 p.
  4. ↑ 1 2 3 Smithies O. Electroforeza zonei în geluri de amidon: variații de grup în proteinele serice ale adulților umani normali  (engleză)  // The Biochemical Journal  : journal. — Londra, Marea Britanie: Biochemical Society ; Portland Press , 1955. Vol. 61, nr. 4 . - P. 629-641. — ISSN 0264-6021 . — PMID 13276348 . Arhivat din original pe 27 februarie 2015.  (Accesat: 27 februarie 2015)
  5. ↑ 1 2 Raymond S., Weintraub L. Gel de acrilamidă ca mediu suport pentru electroforeza zonei  // Science  :  journal. - Washington, DC , SUA: Asociația Americană pentru Avansarea Științei , 1959. - Vol. 130, nr. 3377 . - P. 711. - ISSN 0036-8075 . — PMID 14436634 .  (Data accesării: 27 februarie 2015) Copie arhivată (link nu este disponibil) . Preluat la 13 octombrie 2020. Arhivat din original la 6 octombrie 2017. 
  6. ↑ 1 2 O'Farrell PH Electroforeza bidimensională de înaltă rezoluție a proteinelor  (engleză)  // The Journal of Biological Chemistry: journal. - Baltimore, MD , SUA: Societatea Americană pentru Biochimie și Biologie Moleculară , 1975. - Voi. 250, nr. 10 . - P. 4007-4021. — ISSN 4406-4412 . — PMID 236308 .  (Data accesării: 27 februarie 2015) Copie arhivată (link nu este disponibil) . Consultat la 27 februarie 2015. Arhivat din original la 18 ianuarie 2020. 
  7. ↑ Tiselius A. Un nou aparat pentru analiza electroforetică a amestecurilor coloidale  (engleză)  // Transactions of the Faraday Society  : journal. - Londra, Marea Britanie: Societatea Faraday , 1937. - Vol. 33. - P. 524-531. — ISSN 0014-7672 . - doi : 10.1039/TF9373300524 .  (Accesat: 28 februarie 2015) Copie arhivată (link nu este disponibil) . Preluat la 13 octombrie 2020. Arhivat din original la 10 august 2020. 
  8. ↑ Electroforeza: Teorie, Metode și Aplicații / Ed. de M. Bier. — a 3-a tipărire edn. - New York, NY , SUA: Academic Press, 1964. - P. 225. - 563 p.  (Engleză)  (Data accesării: 27 februarie 2015) Copie arhivată (link inaccesibil) . Consultat la 27 februarie 2015. Arhivat din original la 5 octombrie 2017. 
  9. ↑ Smithies O. O procedură îmbunătățită pentru electroforeza cu gel de amidon: variații suplimentare ale proteinelor serice ale indivizilor normali  //  The Biochemical Journal : journal. — Londra, Marea Britanie: Biochemical Society; Portland Press, 1959. Vol. 71, nr. 3 . - P. 585-587. — ISSN 0264-6021 . — PMID 13638269 . Arhivat din original pe 27 februarie 2015.  (Accesat: 27 februarie 2015)
  10. ↑ Gahne B. Studii privind moștenirea formelor electroforetice de transferine, albumine, prealbumine și esteraze plasmatice ale cailor  // Genetics  :  journal. - Baltimore, MD, SUA: Genetics Society of America , 1966. - Vol. 53, nr. 4 . - P. 681-694. — ISSN 0016-6731 . — PMID 5960258 .  (Data accesării: 27 februarie 2015) Copie arhivată (link nu este disponibil) . Consultat la 27 februarie 2015. Arhivat din original la 5 octombrie 2017. 
  11. ↑ Ornstein L., Davis BJ Disc Electrophoresis. — Rochester, NY , SUA: Distillation Products Industries, Eastman Kodak Co. , 1962.  (engleză)
  12. ↑ Weber K., Osborn M. Fiabilitatea determinărilor de greutate moleculară prin electroforeză pe gel de dodecil sulfat-poliacrilamidă  (engleză)  // The Journal of Biological Chemistry: journal. - Baltimore, MD, SUA: Societatea Americană pentru Biochimie și Biologie Moleculară, 1969. - Voi. 244, nr. 16 . - P. 4406-4412. — ISSN 0021-9258 . — PMID 5806584 .  (Data accesării: 27 februarie 2015) Copie arhivată (link nu este disponibil) . Preluat la 13 octombrie 2020. Arhivat din original la 18 ianuarie 2020. 
  13. ↑ Hunter RL, Merkert CL Demonstrarea histochimică a enzimelor separate prin electroforeză de zonă în geluri de amidon // Știință. - 1957. - Vol. 125. - P. 1294-1295. (Engleză)
  14. ↑ Baker CMA Genetica moleculară a proteinelor aviare. IX. Variația interspecifică și intraspecifică a proteinelor din albușul de ou din genul Gallus  (engleză)  // Genetics : journal. - Baltimore, MD, SUA: Genetics Society of America, 1968. - Vol. 58, nr. 2 . - P. 211-226. — ISSN 0016-6731 . — PMID 5960258 .  (Data accesării: 27 februarie 2015) Copie arhivată (link nu este disponibil) . Consultat la 27 februarie 2015. Arhivat din original la 6 octombrie 2017. 
  15. ↑ Baker CMA, Croizier G., Stratil A., Manwell C. Identity and nomenclature of some protein polymorphisms of chicken eggs and sers  //  Advances in Genetics : journal. - New York, NY, SUA: Academic Press, 1970. - Vol. 15. - P. 147-174. — ISSN 0065-2660 . — PMID 4936422 .  (Data accesării: 27 februarie 2015) Copie arhivată (link nu este disponibil) . Preluat la 13 octombrie 2020. Arhivat din original la 13 octombrie 2020. 
  16. ↑ Romanov MN (07.06.1988). „Studiul polimorfismului genetic al ovoproteinelor la anumite tipuri de ouă și linii de tip carne-ou de găini” . rezumate . Al 4-lea simpozion al tinerilor oameni de știință în păsări. Cracovia , Polonia : Asociația Mondială pentru Știința Avicolă, Filiala Poloneză. p. 10.OCLC 899128291.  _ _ Accesat 2020-10-18 . (Engleză)
  17. ↑ Romanov M. N. (27.01.1994). „Studiul electroforetic al loci ovoproteinelor la populațiile de găini de ou în timpul dezvoltării încrucișării Highsex Brown” . Tez. raport _ Eu Intern. conf. on Molecular Genetic Markers of Animals, Kiev , 27-29 ianuarie 1994. Kiev, Ucraina : Ukr. acad. agrar Științe , Institutul de Creștere a Animalelor și Genetică, Institutul de Agroecologie și Biotehnologie; stiinta agricola. pp. 34-35. OCLC  899128337 . TsNShB , TRN: RU9815007X . Accesat 2015-02-28 . Arhivat din original pe 6 octombrie 2017.
  18. ↑ Romanov M.N.; Cernikov V. F. (27.01.1994). „Ovosveverițele polimorfe ca markeri ai variabilității intrapopulaționale la pescărușii cu cap negru” . Tez. raport _ Eu Intern. conf. on Molecular Genetic Markers of Animals, Kiev, 27-29 ianuarie 1994. Kiev, Ucraina: Ukr. acad. agrar Științe, Institutul de Creștere și Genetică a Animalelor, Institutul de Agroecologie și Biotehnologie; stiinta agricola. pp. 35-36. OCLC  899128260 . Accesat 2015-02-28 . Parametrul depreciat folosit |coauthors=( ajutor ) Arhivat din original pe 8 august 2020.
  19. ↑ Komatsu S., Kojima K., Suzuki K., Ozaki K., Higo K. Rice Proteome Database based on two-dimensional polyacrylamide gel electroforesis: its status in 2003  // Nucleic Acids Research  : journal  . - Oxford , Marea Britanie: Oxford University Press , 2004. - Vol. 32, nr. Problema baza de date . - P. D388-D392. — ISSN 0305-1048 . — PMID 14681440 .  (Accesat: 28 februarie 2015) Copie arhivată (link nu este disponibil) . Preluat la 13 octombrie 2020. Arhivat din original la 3 iunie 2018. 

Literatură

Link -uri