Cromozom bacterian artificial
Un cromozom bacterian artificial ( cromozom artificial bacterian, BAC ) este un sistem vectorial bazat pe plasmida F a E. coli , regiunile cos ale fagului lambda și regiunile loxP ale fagului P1, utilizate pentru clonarea lungă (150-150). 350 [1] kb ) ) Secvențe ADN [2] [3] [4] . Plasmida F codifică gene care reglează replicarea și controlează numărul de copii (1-2 molecule per celulă). Regiunea loxP a ADN-ului plasmid poate fi scindată de proteina Cre a fagului P1, iar regiunea cos poate fi scindată de enzima corespunzătoare a fagului lambda. Un sistem vector similar numit PAC ( cromozom artificial derivat din p1 ) a fost realizat pe baza unei plasmide P1 bacteriene din ADN-ul fagului P1.
Cromozomii bacterieni artificiali sunt adesea folosiți pentru a secvenționa genomurile organismelor în diferite proiecte, cum ar fi Proiectul Genomului Uman . O scurtă bucată de ADN din organismul studiat este introdusă într-un cromozom și apoi amplificată și secvențializată. După aceea, secvențele citite sunt aliniate in silico , rezultând o secvență completă a genomului organismului. Această abordare a fost înlocuită acum de metode de secvențiere mai rapide și mai puțin intensive, cum ar fi metoda pușcă sau metodele de secvențiere de ultimă generație .
Componente genetice
repE
reglează replicarea și numărul de copii ale plasmidei.
paraA și parB
pentru distribuția ADN-ului F-plasmidului în celulele fiice în timpul diviziunii și menținerea stabilă a cromozomului.
marker selectiv
adesea
o genă de rezistență la antibiotice ; unele conțin și
lacZ la locul clonării genei, permițând selecția albastru-alb.
T7 și Sp6
promotori de fagi pentru transcrierea genelor inserate.
Vezi și
- Cromozom uman artificial
- Cromozom de drojdie artificială
- Fosmid
- Cosmid
Note
- ↑ Stone NE, Fan JB, Willour V., Pennacchio LA , Warrington JA, Hu A., Chapelle A., Lehesjoki AE, Cox DR, Myers RM Construcția unei hărți de contig și restricție de clonă bacteriană de 750 kb în regiunea umană cromozomul 21 care conține gena epilepsiei mioclonale progresive // Genome Research : jurnal. - 1996. - Vol. 6 , nr. 3 . - P. 218-225 . - doi : 10.1101/gr.6.3.218 . — PMID 8963899 .
- ↑ O'Connor M., Peifer M., Bender W. Construction of large DNA segments in Escherichia coli // Science : journal. - 1989. - Vol. 244 , nr. 4910 . - P. 1307-1312 . - doi : 10.1126/science.2660262 . — PMID 2660262 .
- ↑ Shizuya H., Birren B., Kim UJ, Mancino V., Slepak T., Tachiiri Y., Simon M. Clonarea și întreținerea stabilă a fragmentelor de ADN uman de 300 de kilobaze în Escherichia coli folosind un factor F- vector bazat (engleză) // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America : journal. - 1992. - Vol. 89 , nr. 18 . - P. 8794-8797 . - doi : 10.1073/pnas.89.18.8794 . — PMID 1528894 .
- ↑ Shizuya, H; Kouros Mehr Hosein. Dezvoltarea și aplicațiile sistemului de clonare a cromozomilor artificiali bacterieni // Keio J Med. : jurnal. - 2001. - Vol. 50 , nr. 1 . - P. 26-30 . - doi : 10.2302/kjm.50.26 . — PMID 11296661 .