Fasmide

Fasmide (din greacă φάγος - devoratoare și engleză  plasmidă , din greacă πλάσμα - ceva format, format) - vectori moleculari care sunt hibrizi artificiali între fag și plasmidă . Fasmidele după inserția de ADN străin se pot dezvolta ca fagi în anumite condiții și ca plasmide în altele .

O fagemidă este o plasmidă care conține originea de replicare f1 a fagului f1 [1] . Poate fi folosit pentru a clona vectorul în combinație cu bacteriofagul filamentos M13 . Fasmida se poate replica ca plasmidă și poate fi, de asemenea, ambalată ca ADN monocatenar în particule virale. Fasmidele conțin o origine de replicare (Ori) pentru replicarea dublu catenară, precum și f1 Ori pentru a permite replicarea monocatenară și ambalarea în particule de fagi [1] . Multe plasmide utilizate în mod obișnuit conțin f1 Ori și sunt astfel fasmide. Ca și plasmidele, ele sunt folosite pentru a clona fragmente de ADN folosind metode precum transformarea și electroporarea . Cu toate acestea, infecția unei gazde bacteriene care conține o fasmidă cu un fag auxiliar, cum ar fi VCSM13 sau M13K07, care furnizează componentele virale necesare pentru ca ADN-ul monocatenar (ssDNA) să fie replicat și împachetat în particule de fagi. Un fag ajutător infectează o bacterie atașându-se mai întâi de pili ei și apoi, după atașare, transportă genomul acesteia în citoplasma celulei gazdă. În interiorul celulei, genomul fagului inițiază producerea de ADN monocatenar al fasmidului în citoplasmă. Acest ADN fasmid este apoi împachetat în particule de fagi. Particulele fagice care conțin ssADN sunt eliberate din celula bacteriană în mediul extracelular. Fagii filamentoși inhibă creșterea bacteriană, dar, spre deosebire de fagul λ și fagul T7 , nu provoacă de obicei liză . Fagii helper sunt de obicei proiectați în așa fel încât ambalarea ADN-ului în ei este mai puțin eficientă (datorită unei origini de replicare defectuoasă) [2] decât ambalarea fasmidică, astfel încât particulele de fagi rezultate să conțină predominant ADN fasmid. Infecția cu fagi filamentoși F1 necesită pili, astfel încât numai gazdele bacteriene care conțin plasmida F sau derivații acesteia pot fi folosite pentru a produce particule de fagi. Înainte de dezvoltarea secvențierii ciclului, fasmidele au fost folosite pentru a genera șabloane ADN monocatenar. Astăzi, fasmidele sunt încă folosite pentru a genera șabloane pentru mutageneza specifică locului . Caracterizarea detaliată a ciclului de viață a fagului filamentos și a caracteristicilor structurale a condus la dezvoltarea tehnologiei de afișare a fagilor , în care o serie de peptide și proteine ​​pot fi exprimate ca proteine ​​de fuziune a stratului de fag pe suprafața unei particule virale. Peptidele și polipeptidele exprimate sunt inserate în regiunea de codificare a ADN-ului corespunzătoare din fag și, prin urmare, această metodă este adecvată pentru studierea interacțiunilor proteină-proteină și a altor combinații ligand /receptor .

Note

1. ↑ 1 2 Analysis of Genes and Genomes, John Wiley & Sons, 2004, S. 140, Google Books Arhivat la 19 august 2020 la Wayback Machine
2. ↑ Lund Paul E., Hunt Ryan C., Gottesman Michael M., Kimchi-Sarfaty Chava. Pseudovirionii ca vehicule pentru livrarea siRNA  (engleză)  // Cercetare farmaceutică: jurnal. - 2010. - Vol. 27 , nr. 3 . - P. 400-420 . - doi : 10.1007/s11095-009-0012-2 . — PMID 19998056 .