Oligonucleotide morfoline

Oligonucleotidele morfolino [1] [2] [3] sau oligomerii morfolino [4] ( de exemplu morfolino  , oligomer morfolino, oligomer morfolino fosforodiamidat, PMO ) sunt oligonucleotide sintetice utilizate în biologia moleculară pentru a modifica expresia genelor . Baza structurii moleculare a oligonucleotidei morfolinei este inelele de metilen morfoline și legăturile fosforodiamidat . Oligonucleotidele morfoline blochează accesul altor molecule la secvențe specifice mici (aproximativ 25 de nucleotide lungime ) datorită împerecherii complementare cu ARN -ul corespunzător . Oligonucleotidele morfoline servesc ca instrumente de cercetare în genetica inversă pentru distrugerea genelor .

Knockdown genei este de a împiedica celula să sintetizeze proteina corespunzătoare [5] . Oligonucleotidele morfoline pot afecta, de asemenea, splicing -ul pre - mARN [6] . Knockdown genetic este un instrument puternic pentru studierea funcției unei anumite gene . În mod similar, excizia unui exon specific dintr-o transcriere permite determinarea funcțiilor îndeplinite de resturile de aminoacizi corespunzătoare ale proteinei și, uneori, duce la inactivarea completă a proteinei. Oligonucleotidele de morfolină sunt folosite în studiul multor organisme model , inclusiv șoareci , pești zebra , broaște și arici de mare [7] .

Se dezvoltă modalități de utilizare a oligonucleotidelor morfoline în medicină împotriva organismelor patogene ( bacterii [8] și viruși [9] ), precum și pentru reducerea manifestării bolilor genetice [10] .

Structura

Oligonucleotidele morfoline sunt molecule sintetice care sunt acizi nucleici modificați [11] . Ele sunt de obicei lungi de 25 de nucleotide și se leagă complementar la secvențele lor de ARN respective prin împerecherea bazelor . Oligonucleotidele morfoline au bazele azotate obișnuite, care în loc de deoxiriboză sunt conectate la inele morfoline și nu fosfat , dar grupări fosforodiamidat sunt implicate în legătura nucleotidelor individuale. Înlocuirea grupărilor fosfat încărcate negativ cu o grupare fosforodiamidat neîncărcată elimină ionizarea la valorile fiziologice ale pH-ului , astfel încât aceste molecule sunt neîncărcate în celulele vii. Întreaga moleculă de oligonucleotide morfolinei este formată din astfel de nucleotide modificate [11] .

Funcții

Oligonucleotidele morfoline nu își degradează ARN-ul țintă, spre deosebire de multe molecule antisens (de exemplu, ARN-uri interferențe mici și fosforotioați ). În schimb, acţionează ca „blocante spaţiale” legându-se de secvenţa ţintă şi împiedicând fizic legarea altor molecule de acel ARN [5] . Oligonucleotidele morfoline sunt adesea folosite pentru a studia rolul ARNm-urilor specifice în embrionul în curs de dezvoltare. Embriologii le injectează în ouă sau embrioni de pește zebră [12] , broaște cu gheare [13] , arici de mare [14] și pești Fundulus heteroclitus , sau livrează aceste molecule prin electroporare embrionilor de pui în stadiile ulterioare de dezvoltare [15] ; embrionii tratați în acest mod se numesc morfanți . În prezența sistemelor corecte de livrare în citosol , oligonucleotidele morfoline pot fi eficiente și în culturile celulare [16] [17] .

Blocarea difuzării

Prin legarea la regiunea 5’-netradusă a ARNm, oligonucleotidele morfoline pot împiedica ribozomul , în combinație cu factorii de inițiere a translației eucarioți , să se deplaseze de la capac la codonul de pornire . Acest lucru previne translația regiunii de codificare a transcriptului țintă (knockdown genei). Această tehnică este foarte convenabilă atunci când cercetătorul dorește să determine funcția unei anumite proteine; efectele distrugerii genelor asupra unei celule sau organism sunt folosite pentru a judeca funcția unei proteine. Unele oligonucleotide morfoline blochează expresia atât de eficient încât, după degradarea proteinei sintetizate înainte de introducerea oligonucleotidelor, această proteină devine nedetectabilă prin Western blot [18] .

Schimbare în splicing pre-ARNm

Oligonucleotidele morfoline pot interfera cu procesarea pre-ARNm în următoarele moduri:

• prin prevenirea legarii ribonucleoproteinelor nucleare mici ( snRNP ) care direcționează splicing-ul la țintele lor la granițele intronului din pre-ARNm;
• blocarea reziduului de adenină , efectuează un atac nucleofil în timpul îmbinării și formează o structură laso;
• interferând cu legarea proteinelor reglatoare de splicing, cum ar fi amortizoarele [19] și amplificatorii de splicing [20] .

Prevenirea legării ribonucleoproteinelor U1 (la locul donor) sau U2 / U5 (la tractul polipirimidinic sau la situsul acceptor) poate duce la modificarea splicing-ului în care exonii sunt excluși din ARNm matur. . Impactul asupra altor site-uri de splicing duce la includerea intronilor în ARNm matur, în timp ce activarea site-urilor de splicing ascunse poate duce atât la incluziuni, cât și la excluderi [21] . Oligonucleotidele morfoline pot bloca, de asemenea, țintele snRNP U11 / U12 [22] . Modificările în splicing sunt monitorizate în mod convenabil utilizând PCR cu transcripție inversă (RT-PCR) și electroforeză (în timpul electroforezei produselor RT-PCR, se observă deplasări de bandă în gel) [6] .

Alte utilizări

Oligonucleotidele morfoline au fost folosite pentru a bloca activitatea microARN [23] [24] și maturarea lor [25] . Oligonucleotidele morfoline marcate cu fluoresceină în combinație cu anticorpi specifici fluoresceinei pot fi utilizate ca sonde de hibridizare in situ cu microARN [26] . În plus, ele pot bloca activitatea ribozimelor [27] precum și funcționarea snRNP U2 și U12 [28] . Oligonucleotidele morfoline care vizează secvențele de ARNm goale din regiunea de codificare pot provoca o schimbare de cadre în timpul translației [29] . De asemenea, pot bloca editarea ARN . Eficacitatea oligonucleotidelor morfoline în raport cu multe ținte le face un instrument universal pentru suprimarea interacțiunii proteinelor sau acizilor nucleici cu ARNm [30] .

Specificitate, stabilitate și efecte non-antisens

Oligonucleotidele morfoline au devenit un instrument standard pentru distrugerea genelor în sistemele embrionare animale , care exprimă mai multe gene decât celulele adulte. După injectarea unei oligonucleotide morfoline în embrioni de broască sau de pește în stadiul uneia sau mai multor celule, cel mai mare efect apare în ziua a cincea [31] , când cea mai mare parte a organogenezei și diferențierii celulelor și țesuturilor este deja în urmă; fenotipurile observate corespund knockout-ului unei anumite gene. Nucleotidele de control care nu vizează nicio secvență, în general, nu provoacă modificări în fenotipul embrionului, confirmând faptul că oligonucleotidele morfoline acționează specific secvenței și, în general, nu au efecte non-antisens. Doza necesară pentru distrugerea genei poate fi redusă prin introducerea simultană a mai multor oligonucleotide morfoline care vizează același ARNm; această abordare face posibilă reducerea sau eliminarea completă a interacțiunilor dependente de doză ale oligonucleotidelor cu ARN care nu sunt ținte directe [32] .

În experimentele de „salvare” ARNm în embrioni, a fost adesea posibil să se returneze fenotipul de tip sălbatic . În timpul acestor experimente, o oligonucleotidă de morfolină este introdusă în celulă împreună cu ARNm care codifică proteina pe care această oligonucleotidă este direcționată să o distrugă. Totuși, ARNm introdus are o regiune 5'-netradusă modificată și, prin urmare, nu are o secvență țintă pentru oligonucleotida morfolinei, dar regiunea sa de codificare este păstrată și proteina de interes este sintetizată din aceasta. Translația din ARNm „salvator” restabilește formarea proteinei care a fost oprită de oligonucleotida morfolinei. ARNm de salvare nu provoacă anomalii fenotipice, deoarece nu afectează expresia genelor care nu sunt ținta oligonucleotidului introdus, astfel încât revenirea la fenotipul de tip sălbatic este o altă dovadă a specificității secvenței oligonucleotidelor morfoline [31] .

Datorită structurii chimice complet nenaturale, oligonucleotidele morfoline nu sunt recunoscute de proteinele celulare. Nucleazele nu le distrug [33] , deci nu sunt distruse nici în celule, nici în plasma sanguină [34] . Oligonucleotidele morfoline nu activează receptorii de tip Toll și, prin urmare, nu declanșează un răspuns imun înnăscut , exprimat, în special, în formarea interferonului sau în inflamația mediată de NF-κB [35] .

Până la 18% dintre oligonucleotidele morfoline provoacă fenotipuri care nu sunt asociate cu țintele inițiale, în special, moartea celulelor sistemului nervos central și a somitelor în embrionii de pește zebra [36] . Majoritatea acestor efecte s-au dovedit a fi datorate activării apoptozei mediate de p53 ; ele pot fi suprimate prin introducerea simultană a unei oligonucleotide morfoline experimentale și a analogului său anti-p53. Mai mult, activarea apoptozei mediate de p53 indusă de oligonucleotida morfolinei ar putea fi repetată folosind alte structuri antisens, ceea ce sugerează că apoptoza mediată de p53 poate fi cauzată de pierderea proteinei țintă și nu depinde de tipul de oligonucleotidă utilizat pentru doborare [37] .

Oligonucleotidele de morfolină trebuie utilizate cu prudență datorită efectelor lor potențiale în afara proteinei țintă. Un al doilea experiment poate fi efectuat pentru a testa dacă fenotipul morfant observat este rezultatul distrugerii genei intenţionate sau este cauzat de o interacţiune cu un ARN care nu este ţinta directă a oligonucleotidei introduse. Acest experiment constă în repetarea fenotipului ( fenocopiei ) morfantului folosind o altă oligonucleotidă morfolină care vizează aceeași țintă, dar care nu se suprapune cu prima oligonucleotidă [31] .

Livrare

Pentru ca o oligonucleotidă morfolină să acționeze, aceasta trebuie să intre în citosolul celulei și să traverseze membrana celulară . După ce a pătruns în citosol, acesta începe să difuzeze liber între citosol și nucleu , așa cum s-a arătat în experimentele în care introducerea unei nucleotide morfoline în citosolul unei celule a schimbat splicing-ul în nucleu [6] . Sunt utilizate diferite metode pentru a furniza o oligonucleotidă de morfolină la embrioni, celule de cultură sau celule animale adulte.

De regulă, microinjecțiile sunt utilizate pentru livrarea la embrioni, iar introducerea oligonucleotidelor se realizează de obicei în stadiul uneia sau mai multor celule [38] . O metodă alternativă pentru livrarea oligonucleotidelor morfoline la embrioni este electroporarea, care le permite să fie livrate la țesuturi în stadiile ulterioare ale dezvoltării embrionare [39] .

Cele mai comune metode de eliberare a oligonucleotidelor morfoline în celulele de cultură sunt utilizarea unei peptide endoportor ,  care determină eliberarea oligonucleotidelor morfoline din endozomi [17] ; un  sistem special de livrare care utilizează un heteroduplex de ADN cu o oligonucleotidă de morfolină și polietilenimină etoxilată ca reactiv de livrare (nu mai este disponibil comercial) [16] ; electroporare [40] ; metoda de încărcare cu răzuire [ 41 ] . În 2015, a fost descris un sistem de eliberare amfipatică cu trans-activare pe bază de ADN, care este conceput pentru a furniza în mod convenabil acizi nucleici neîncărcați având o coadă poli(A), cum ar fi acizii peptidonucleici și oligonucleotidele morfoline [42] .  

Livrarea oligonucleotidelor morfoline în țesuturile animalelor adulte este dificilă, deși au fost dezvoltate mai multe sisteme pentru a furniza oligonucleotide morfoline nemodificate către țesuturi (în special către celulele musculare slabe în mod natural din distrofia musculară Duchenne [43] sau către celulele endoteliale vasculare care sunt stresate în timpul angioplastie [44] ). Deși oligonucleotidele morfoline trec efectiv prin spațiile intercelulare din țesuturi, livrarea lor către celule este dificilă. Livrarea sistemică la celule de multe tipuri poate fi efectuată cu ajutorul oligonucleotidelor morfoline legate covalent la peptide penetrante celulare [ și , în timp ce dozele medii de peptide legate au un efect toxic  [ 45 ] [ 46] , în condiții in vivo , a fost posibil să se realizeze livrarea eficientă a oligonucleotidelor morfoline la doze de peptide sub toxice [9] [47] . Un dendrimer octaguanidin atașat la capătul unei oligonucleotide morfoline (așa-numitul Vivo-Morpholino) asigură livrarea acesteia din sânge în citosol atunci când este injectat sistematic într-un animal adult [48] [49] .

Semnificație medicală

Oligonucleotidele morfoline capabile de livrare eficientă (cum ar fi oligonucleotidele morfoline legate de peptide și Vivo-Morpholino) pot fi agenți promițători pentru tratamentul bolilor virale și genetice [50] . De exemplu, Sarepta Therapeutics Inc. dezvoltă deja oligonucleotide morfoline, un potențial medicament numit NeuGene. În prezent, oligonucleotidele morfoline sunt în curs de studii clinice , care pot fi utilizate pentru tratamentul miodistrofiei Duchenne la om [51] .

Note

1. ↑ Appel și colab., 2013 , p. 206.
2. ↑ P. V. Zolotukhin, Yu. A. Lebedeva, O. N. Kuzminova, E. K. Bryukhanov. Modificări și analogi ai acizilor nucleici: instrumente de biologie moleculară modernă  // Valeology. - 2013. - Nr 2 . - S. 27-33 . — ISSN 2218-2268 .
3. ↑ N. M. Belonogov. Genetica „directă” și „reversă”. Genetica trăsăturilor cantitative  // ​​Vavilov Journal of Genetics and Breeding. - 2014. - T. 18 , Nr. 1 . - S. 147-157 .
4. ↑ T. V. Abramova, V. N. Silnikov. Sinteza și proprietățile analogilor de oligonucleotide și mimetice ale acizilor nucleici modificați de scheletul carbohidrat-  fosfat // Usp. chim.. - 2011. - T. 80 , nr 5 . - S. 452-476 .
5. ↑ 1 2 Summerton J. Oligomeri antisens Morpholino: cazul unui tip structural independent de RNază H.  (engleză)  // Biochimica et biophysica acta. - 1999. - Vol. 1489, nr. 1 . - P. 141-158. — PMID 10807004 .
6. ↑ 1 2 3 Draper BW , Morcos PA , Kimmel CB Inhibarea peștelui zebra fgf8 pre-mRNA splicing cu morpholino oligos: o metodă cuantificabilă pentru distrugerea genelor.  (engleză)  // Genesis (New York, NY: 2000). - 2001. - Vol. 30, nr. 3 . - P. 154-156. — PMID 11477696 .
7. ↑ Heasman J. Morpholino oligos: înțelesul antisensului?  (engleză)  // Biologie de dezvoltare. - 2002. - Vol. 243, nr. 2 . - P. 209-214. - doi : 10.1006/dbio.2001.0565 . — PMID 11884031 .
8. ↑ Geller BL Antisens antibacterian.  (Engleză)  // Opinie actuală în terapie moleculară. - 2005. - Vol. 7, nr. 2 . - P. 109-113. — PMID 15844617 .
9. ↑ 1 2 Deas TS , Bennett CJ , Jones SA , Tilgner M. , Ren P. , Behr MJ , Stein DA , Iversen PL , Kramer LD , Bernard KA , Shi PY Selecția rezistenței in vitro și eficacitatea in vivo a oligomerilor morfolino împotriva West Nilevirus.  (Engleză)  // Agenți antimicrobieni și chimioterapie. - 2007. - Vol. 51, nr. 7 . - P. 2470-2482. - doi : 10.1128/AAC.00069-07 . — PMID 17485503 .
10. ↑ McClorey G. , Fall AM , Moulton HM , Iversen PL , Rasko JE , Ryan M. , Fletcher S. , Wilton SD Sarirea exonului indus de distrofină în explantele musculare umane.  (engleză)  // Tulburări neuromusculare : NMD. - 2006. - Vol. 16, nr. 9-10 . - P. 583-590. - doi : 10.1016/j.nmd.2006.05.017 . — PMID 16919955 .
11. ↑ 1 2 Summerton J. , Weller D. Morpholino antisens oligomers: design, preparation, and properties.  (Engleză)  // Dezvoltarea de medicamente antisens și acid nucleic. - 1997. - Vol. 7, nr. 3 . - P. 187-195. — PMID 9212909 .
12. ↑ Nasevicius A. , Ekker SC „knockdown” eficient al genei vizate la peștele-zebra.  (engleză)  // Genetica naturii. - 2000. - Vol. 26, nr. 2 . - P. 216-220. - doi : 10.1038/79951 . — PMID 11017081 .
13. ^ Heasman J. , Kofron M. , Wylie C. Activitatea de semnalizare a beta-cateninei disecate în embrionul timpuriu Xenopus: o nouă abordare antisens.  (engleză)  // Biologie de dezvoltare. - 2000. - Vol. 222, nr. 1 . - P. 124-134. doi : 10.1006 / dbio.2000.9720 . — PMID 10885751 .
14. ↑ Howard EW , Newman LA , Oleksyn DW , Angerer RC , Angerer LM SpKrl: o țintă directă a reglementării beta-cateninei necesare pentru diferențierea endodermului la embrionii de arici de mare.  (engleză)  // Dezvoltare (Cambridge, Anglia). - 2001. - Vol. 128, nr. 3 . - P. 365-375. — PMID 11152635 .
15. ↑ Kos R. , Reedy MV , Johnson RL , Erickson CA Factorul de transcripție cu helix înaripat FoxD3 este important pentru stabilirea descendenței crestei neurale și reprimarea melanogenezei la embrionii aviari.  (engleză)  // Dezvoltare (Cambridge, Anglia). - 2001. - Vol. 128, nr. 8 . - P. 1467-1479. — PMID 11262245 .
16. ↑ 1 2 Morcos PA Obținerea unei livrări eficiente de morpholino oligos în celulele de cultură.  (engleză)  // Genesis (New York, NY: 2000). - 2001. - Vol. 30, nr. 3 . - P. 94-102. — PMID 11477682 .
17. ↑ 1 2 Summerton JE Endo-Porter: un nou reactiv pentru livrarea sigură și eficientă a substanțelor în celule.  (engleză)  // Analele Academiei de Științe din New York. - 2005. - Vol. 1058. - P. 62-75. doi : 10.1196 / anals.1359.012 . — PMID 16394126 .
18. ↑ Stancheva I. , Collins AL , Van den Veyver IB , Zoghbi H. , Meehan RR O formă mutantă a proteinei MeCP2 asociată cu sindromul Rett uman nu poate fi deplasată din ADN-ul metilat prin crestătură în embrionii Xenopus.  (Engleză)  // Celulă moleculară. - 2003. - Vol. 12, nr. 2 . - P. 425-435. — PMID 14536082 .
19. ↑ Bruno IG , Jin W. , Cote GJ Corectarea splicing-ului alternativ aberant al ARN-ului FGFR1 prin țintirea elementelor de reglementare intrronice.  (engleză)  // Genetica moleculară umană. - 2004. - Vol. 13, nr. 20 . - P. 2409-2420. doi : 10.1093 / hmg/ddh272 . — PMID 15333583 .
20. ↑ Vetrini F. , Tammaro R. , Bondanza S. , Surace EM , Auricchio A. , De Luca M. , Ballabio A. , Marigo V. Aberrant splicing in the ocular albinism type 1 gene (OA1/GPR143) is corrected in vitro prin oligonucleotide morfolino antisens.  (engleză)  // Mutație umană. - 2006. - Vol. 27, nr. 5 . - P. 420-426. - doi : 10.1002/humu.20303 . — PMID 16550551 .
21. ↑ Morcos PA Realizarea modificării țintite și cuantificabile a splicing-ului ARNm cu Morpholino oligos.  (engleză)  // Comunicații de cercetare biochimică și biofizică. - 2007. - Vol. 358, nr. 2 . - P. 521-527. - doi : 10.1016/j.bbrc.2007.04.172 . — PMID 17493584 .
22. ↑ König H. , Matter N. , Bader R. , Thiele W. , Müller F. Splicing segregation: the minor spliceosome acţionează în afara nucleului şi controlează proliferarea celulară.  (engleză)  // Cell. - 2007. - Vol. 131, nr. 4 . - P. 718-729. - doi : 10.1016/j.cell.2007.09.043 . — PMID 18022366 .
23. ↑ Kloosterman WP , Wienholds E. , Ketting RF , Plasterk RH Cerințe de substrat pentru funcționarea let-7 în embrionul de pește-zebră în curs de dezvoltare.  (engleză)  // Cercetarea acizilor nucleici. - 2004. - Vol. 32, nr. 21 . - P. 6284-6291. doi : 10.1093 / nar/gkh968 . — PMID 15585662 .
24. ↑ Flynt AS , Li N. , Thatcher EJ , Solnica-Krezel L. , Patton JG Zebrafish miR-214 modulează semnalizarea ariciului pentru a specifica soarta celulelor musculare.  (engleză)  // Genetica naturii. - 2007. - Vol. 39, nr. 2 . - P. 259-263. - doi : 10.1038/ng1953 . — PMID 17220889 .
25. ↑ Kloosterman WP , Lagendijk AK , Ketting RF , Moulton JD , Plasterk RH Inhibarea vizată a maturării miARN cu morfolinos dezvăluie un rol pentru miR-375 în dezvoltarea insulelor pancreatice.  (engleză)  // Public Library of Science Biology. - 2007. - Vol. 5, nr. 8 . — P. e203. - doi : 10.1371/journal.pbio.0050203 . — PMID 17676975 .
26. ↑ Lagendijk AK , Moulton JD , Bakkers J. Detalii revelatoare: protocolul de hibridizare in situ cu microARN de montare întreg pentru embrioni de pește zebra și țesuturi adulte.  (engleză)  // Biologie deschisă. - 2012. - Vol. 1, nr. 6 . - P. 566-569. - doi : 10.1242/bio.2012810 . — PMID 23213449 .
27. ^ Yen L. , Svendsen J. , Lee JS , Gray JT , Magnier M. , Baba T. , D'Amato RJ , Mulligan RC Controlul exogen al expresiei genelor la mamifere prin modularea auto-clivajului ARN.  (engleză)  // Natură. - 2004. - Vol. 431, nr. 7007 . - P. 471-476. - doi : 10.1038/nature02844 . — PMID 15386015 .
28. ↑ Matter N. , König H. „knockdown” vizat al funcției spliceosome în celulele de mamifere.  (engleză)  // Cercetarea acizilor nucleici. - 2005. - Vol. 33, nr. 4 . — P. e41. - doi : 10.1093/nar/gni041 . — PMID 15731334 .
29. ↑ Howard MT , Gesteland RF , Atkins JF Stimularea eficientă a deplasării cadrului ribozomilor specifice locului de către oligonucleotidele antisens.  (engleză)  // RNA (New York, NY). - 2004. - Vol. 10, nr. 10 . - P. 1653-1661. - doi : 10.1261/rna.7810204 . — PMID 15383681 .
30. ↑ Penn AC , Balik A. , Greger IH Inhibarea antisens steric a receptorului AMPA Editarea Q/R dezvăluie cuplarea strânsă cu site-urile de editare intrronică și splicing.  (engleză)  // Cercetarea acizilor nucleici. - 2013. - Vol. 41, nr. 2 . - P. 1113-1123. - doi : 10.1093/nar/gks1044 . — PMID 23172291 .
31. ↑ 1 2 3 Bill BR , Petzold AM , Clark KJ , Schimmenti LA , Ekker SC Un grund pentru utilizarea morfolinoului la peștele zebra.  (engleză)  // Zebrafish. - 2009. - Vol. 6, nr. 1 . - P. 69-77. doi : 10.1089 / zeb.2008.0555 . — PMID 19374550 .
32. ↑ Kamachi Y. , Okuda Y. , Kondoh H. Evaluarea cantitativă a eficienței knockdown a oligonucleotidelor antisens morfolino în embrionii de pește zebra folosind un test de luciferază.  (engleză)  // Genesis (New York, NY: 2000). - 2008. - Vol. 46, nr. 1 . - P. 1-7. - doi : 10.1002/dvg.20361 . — PMID 18196596 .
33. ↑ Hudziak RM , Barofsky E. , Barofsky DF , Weller DL , Huang SB , Weller DD Rezistența oligomerilor morfolino fosforodiamidat la degradarea enzimatică.  (Engleză)  // Dezvoltarea de medicamente antisens și acid nucleic. - 1996. - Vol. 6, nr. 4 . - P. 267-272. — PMID 9012862 .
34. ↑ Youngblood DS , Hatlevig SA , Hassinger JN , Iversen PL , Moulton HM Stabilitatea conjugatelor peptide-morfolino-oligomer care pătrund în celule în serul uman și în celule.  (engleză)  // Chimie bioconjugate. - 2007. - Vol. 18, nr. 1 . - P. 50-60. doi : 10.1021 / bc060138s . — PMID 17226957 .
35. ↑ John D. Moulton. O scurtă introducere în Morpholino Antisens. — 2011.
36. ↑ Ekker SC , Larson JD Tehnologia Morphant în sistemele de dezvoltare a modelelor.  (engleză)  // Genesis (New York, NY: 2000). - 2001. - Vol. 30, nr. 3 . - P. 89-93. — PMID 11477681 .
37. ↑ Robu ME , Larson JD , Nasevicius A. , Beiraghi S. , Brenner C. , Farber SA , Ekker SC p53 activation by knockdown technologies.  (Engleză)  // Genetica PLoS. - 2007. - Vol. 3, nr. 5 . - P. e78. - doi : 10.1371/journal.pgen.0030078 . — PMID 17530925 .
38. ^ Rosen JN , Sweeney MF , Mably JD Microinjecție de embrioni de pește zebra pentru a analiza funcția genelor. (engleză)  // Jurnal de experimente vizualizate : JoVE. - 2009. - Nr. 25 . - doi : 10.3791/1115 . — PMID 19274045 .  
39. ↑ Cerda GA , Thomas JE , Allende ML , Karlstrom RO , Palma V. Electroporation of DNA, ARN, and morpholinos into zebrafish embryons.  (engleză)  // Metode (San Diego, California). - 2006. - Vol. 39, nr. 3 . - P. 207-211. - doi : 10.1016/j.ymeth.2005.12.009 . — PMID 16837210 .
40. ↑ Jubin R. Optimizarea condițiilor de electroporare pentru livrarea intracelulară a oligonucleotidelor antisens morfolino îndreptate împotriva site-ului intern de intrare a ribozomului virusului hepatitei C.  (Engleză)  // Metode în medicina moleculară. - 2005. - Vol. 106. - P. 309-322. — PMID 15375324 .
41. ^ Partridge M. , Vincent A. , Matthews P. , Puma J. , Stein D. , Summerton J. A simple method for delivering morpholino antisens oligos into cytoplasm of cells.  (Engleză)  // Dezvoltarea de medicamente antisens și acid nucleic. - 1996. - Vol. 6, nr. 3 . - P. 169-175. — PMID 8915501 .
42. ↑ H. V. Jain, D. Verthelyi și S. L. Beaucage. Elementele de ADN fosforotioat cu acțiune trans amfipatică mediază livrarea secvențelor de acid nucleic neîncărcat în celulele de mamifere // RSC Adv.. - 2015. - Vol. 5. - Str. 65245-65254. - doi : 10.1039/C5RA12038A .
43. ^ Fletcher S. , Honeyman K. , Fall AM , Harding PL , Johnsen RD , Wilton SD Expresia distrofinei la șoarecele mdx după administrarea localizată și sistemică a unei oligonucleotide antisens morfolino.  (Engleză)  // Jurnalul de medicină genetică. - 2006. - Vol. 8, nr. 2 . - P. 207-216. - doi : 10.1002/jgm.838 . — PMID 16285002 .
44. ↑ Kipshidze NN , Kim HS , Iversen P. , Yazdi HA , Bhargava B. , New G. , Mehran R. , Tio F. , Haudenschild C. , Dangas G. , Stone GW , Iyer S. , Roubin GS , Leon MB , Moses JW Livrarea coronariană intramurală a oligonucleotidelor antisens avansate reduce formarea neointimale în modelul de restenoză de stent porcin.  (engleză)  // Jurnalul Colegiului American de Cardiologie. - 2002. - Vol. 39, nr. 10 . - P. 1686-1691. — PMID 12020498 .
45. ↑ Abes S. , Moulton HM , Clair P. , Prevot P. , Youngblood DS , Wu RP , Iversen PL , Lebleu B. Vectorizarea oligomerilor morfolino de către peptida (R-Ahx-R)4 permite corectarea eficientă a splicing-ului în absență a agenţilor endosomolitici.  (Engleză)  // Jurnalul de eliberare controlată: jurnalul oficial al Societății de eliberare controlată. - 2006. - Vol. 116, nr. 3 . - P. 304-313. - doi : 10.1016/j.jconrel.2006.09.011 . — PMID 17097177 .
46. ^ Burrer R. , Neuman BW , Ting JP , Stein DA , Moulton HM , Iversen PL , Kuhn P. , Buchmeier MJ Efecte antivirale ale oligomerilor morfolino antisens în modelele de infecție cu coronavirus murin.  (engleză)  // Jurnal de virologie. - 2007. - Vol. 81, nr. 11 . - P. 5637-5648. - doi : 10.1128/JVI.02360-06 . — PMID 17344287 .
47. ↑ Amantana A. , Moulton HM , Cate ML , Reddy MT , Whitehead T. , Hassinger JN , Youngblood DS , Iversen PL Farmacocinetica, biodistribuția, stabilitatea și toxicitatea unui conjugat peptidă-morfolino oligomer care pătrunde în celule.  (engleză)  // Chimie bioconjugate. - 2007. - Vol. 18, nr. 4 . - P. 1325-1331. doi : 10.1021 / bc070060v . — PMID 17583927 .
48. ↑ Li YF , Morcos PA Proiectarea și sinteza transportorului molecular dendritic care realizează livrarea eficientă in vivo de oligo antisens morfolino.  (engleză)  // Chimie bioconjugate. - 2008. - Vol. 19, nr. 7 . - P. 1464-1470. - doi : 10.1021/bc8001437 . — PMID 18564870 .
49. ↑ Morcos PA , Li Y. , Jiang S. Vivo-Morpholinos: un transportor non-peptidic livrează Morpholinos într-o gamă largă de țesuturi de șoarece.  (engleză)  // BioTehnici. - 2008. - Vol. 45, nr. 6 . - P. 613-614. — PMID 19238792 .
50. ↑ Moulton JD , Jiang S. Knockdowns de gene la animalele adulte: PPMOs și vivo-morpholinos.  (engleză)  // Molecules (Basel, Elveția). - 2009. - Vol. 14, nr. 3 . - P. 1304-1323. - doi : 10.3390/molecules14031304 . — PMID 19325525 .
51. ↑ Studiu de eficacitate al AVI-4658 pentru a induce expresia distrofinei la pacienți selectați cu distrofie musculară Duchenne . Consultat la 25 octombrie 2015. Arhivat din original la 8 decembrie 2015. (nedefinit)

Literatură

• B. Appel et al. Acizi nucleici: de la A la Z / ed. S. Muller. — M. : BINOM. Laboratorul de cunoștințe, 2013. - P.  206 . — 413 p. - ISBN 978-5-9963-0376-2 .
• Subbotina E. , Koganti SR , Hodgson-Zingman D. , Zingman LV Morpholino-driven gene editing: Un nou orizont pentru tratamentul și prevenirea bolilor.  (engleză)  // Farmacologie clinică și terapie. - 2015. - doi : 10.1002/cpt.276 . — PMID 26474085 .
• Bhadra J. , Pattanayak S. , Sinha S. Sinteza monomerilor morfolino, monomerilor clorofosforamidat și sinteza în fază solidă a oligomerilor morfolino scurți.  (engleză)  // Protocoale actuale în chimia acidului nucleic / editat de Serge L. Beaucage ... [et al.]. - 2015. - Vol. 62. - P. 4-65. - doi : 10.1002/0471142700.nc0465s62 . — PMID 26380905 .
• Moulton HM Livrarea in vivo a morfolino oligos prin peptide care pătrund în celule.  (engleză)  // Design farmaceutic actual. - 2013. - Vol. 19, nr. 16 . - P. 2963-2969. — PMID 23140456 .

Link -uri

• Instrumente genetice: Morpholino antisens oligos . (nedefinit)